Отделение по педиатрия на Университета на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, САЩ, Детски хранителен център в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

майки

Принадлежност на Центъра за детско хранене в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

Принадлежност на Центъра за детско хранене в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

Отдел по физиология и биофизика, Университет на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, САЩ, Детски хранителен център в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

Отдел по фармакология и токсикология, Университет на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати, Детски хранителен център в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

Катедра по педиатрия, Университет на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати, Катедра по физиология и биофизика, Университет на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати, Център за детско хранене в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

Катедра по педиатрия, Университет на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати, Катедра по фармакология и токсикология, Университет на Арканзас за медицински науки, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати, Център за детско хранене в Арканзас, Литъл Рок, Арканзас, Съединени американски щати

  • Сара Дж. Боренгасер,
  • Франческа Лау,
  • Пинг Канг,
  • Майкъл Л. Блекбърн,
  • Мартин Дж. Дж. Ронис,
  • Томас М. Язовец,
  • Картик Шанкар

Фигури

Резюме

Непряка калориметрия

РНК изолация и RT-PCR в реално време

Обща РНК беше изолирана от черния дроб на потомството при PND21 (N = 15/група), използвайки RNeasy мини колони (QIAGEN, Валенсия, Калифорния), включително разграждане на DNase в колона. Един микрограм от обща РНК се транскрибира обратно, използвайки IScript cDNA синтез комплект (BioRad, Hercules, СА). PCR анализът в реално време се извършва с помощта на itaq SYBR Green Supermix (Biorad, Hercules, CA) с всяка проба, изпълнена в синглет, както е описано по-рано, използвайки инструмент ABI Prism 7500 [17], [22]. Генно специфични праймери са проектирани с помощта на Primer Express Software за сиртуини (SIRT) 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7 и активиран от пероксизома пролифератор гама-коактиватор (PGC) -1α (маса 1). Относителните количества на иРНК се определят количествено, като се използва стандартна крива, изпълнена в дубликати и се нормализира до експресията на SRP14.

Имуноблотинг и имунопреципитация

Статистически анализ

Данните са изразени като средни стойности ± SEM, значимостта е зададена на p Фигура 1. Непряка калориметрия на потомство от слаби и затлъстели язовири на плъхове.

(A) EC50 стойности за разход на енергия (kcal/ден) и (Б.) Съотношение на дихателната обмяна (RER), както е показано от PRCF анализ при потомството на слаби и затлъстели язовири (N = 5 на група), хранени или AIN-93G, или диета с високо съдържание на мазнини (45% kcals от мазнини) ad libitum. Стойностите на ЕС50 също бяха включени като средни стойности ± SE. Различните горни индекси показват статистическа значимост (p Фигура 2. Чернодробна иРНК експресия на сиртуин 1-7 от потомство на слаби и затлъстели язовири при PND 21.

Експресията на гена се оценява чрез RT-PCR в реално време (N = 7 на група). Стойностите се изразяват като средни стойности ± SE. Статистическите разлики бяха определени с помощта на t-тест на Student. * показва р Фигура 3. Чернодробно съдържание на митохондриални протеини SIRT3 на слаби и затлъстели потомци.

Представително петно ​​и денситометрично количествено определяне на съдържанието на протеин SIRT3 в митохондриалната фракция от черен дроб на потомство на слаби и затлъстели язовири при PND21 чрез Western blotting (N = 4 пула, представляващи общо 8 животни/група). Стойностите се изразяват като средни стойности ± SE. Статистическите разлики бяха определени с помощта на t-тест на Student. * показва p Фигура 4. Електронно-транспортни верижни комплекси от митохондриални фракции на черния дроб от потомство на слаби и затлъстели язовири при PND 21.

(A) Представителни петна и (B) денситометрично количествено определяне (N = 3–4 пула, представляващи общо 6–8 животни/група). Стойностите се изразяват като средни стойности ± SE. Статистическите разлики бяха определени с помощта на t-тест на Student. * показва p Фигура 5. Индуцирани с гладуване промени в SIRT3 и PGC-1α mRNA и протеинова експресия на слаби и затлъстели потомци на язовири.

(A) SIRT3 иРНК експресия, (Б.) SIRT3 съдържание на митохондриален протеин и (° С) Експресия на PGC-1α иРНК в черния дроб от хранено и гладно потомство на слаби и затлъстели майки при PND 21 (N = 8-15 на група). Представително петно ​​е показано също на ФИГ. 5В за съдържание на протеин SIRT3 (N = 4 на група). Стойностите са изразени като средни стойности ± SE, различните горни индекси показват статистическа значимост (p Фигура 6. Съдържание на чернодробни митохондриални протеини и ацетилиране на LCAD на постно и затлъстело потомство на язовир.

В заключение показахме, че майчиното затлъстяване допринася за ранните смущения в цялото тяло и метаболизма на енергията на черния дроб при потомството при отбиване. Намалената експресия на SIRT3 и други ключови митохондриални протеини, участващи в окисляването на мастните киселини и OXPHOS предполагат, че митохондриалната дисфункция може да предшества по-вредни съпътстващи заболявания, свързани с наднорменото тегло, като инсулинова резистентност и NAFLD.

Благодарности

Благодарим на Мат Фъргюсън и членовете на ACNC-Основния инструмент за изследване на животните за тяхната помощ с TEN. Благодарим на Jamie Badeaux, Crystal Combs и Michèle Perry за техническата помощ. Благодарим на д-р Джерард Вокли (Университет в Питсбърг, Детска болница в Питсбърг, Питсбърг, Пенсилвания) за предоставянето на анти-LCAD антитела.

Принос на автора

Замислени и проектирани експерименти: SJB KS MJR TMB. Изпълнява експериментите: SJB FL PK. Анализирани данни: SJB FL KS MJR TMB. Реактиви/материали/инструменти за анализ, допринесени: SJB MLB PK FL. Написа хартията: SJB MLB KS MJR TMB.