Говеждият серумен албумин (BSA) има единична сулфхидрилна група, която може да се използва по този начин за получаване на неогликопротеин, носещ единична олигозахаридна верига с определена структура.

говежди

Свързани термини:

  • Пептид
  • Ензими
  • Антигени
  • Протеини
  • ДНК
  • Суроватъчен белтък
  • Наночастици
  • Бета-лактоглобулин

Изтеглете като PDF

За тази страница

Говежди серумен албумин

Главна информация

Говежди серумен албумин често се използва като протеинова добавка в клетъчната култура, а остатъчният говежди серумен албумин в някои формулировки понякога причинява неблагоприятни ефекти. Симптомите обикновено са леки, като сърбеж и уртикария. Анафилактична реакция е описана при пациент, подложен на трансплантация на костен мозък, след като клетките на костния мозък са били държани в говежди серумен албумин. Като компонент на среда за обработка на сперматозоиди, говеждият серумен албумин е причинил неблагоприятни ефекти след вътрематочно осеменяване [1]. Съобщава се също, че говеждият серумен албумин причинява мембранна нефропатия в ранна детска възраст [2]. Рискът от предаване на nvCJD от рекомбинантни протеини е неизвестен, тъй като клетъчните култури, използвани за тяхното производство, често съдържат говежди серумен албумин [3].

Разделяне и анализ

8.9.3.1.1 Говежди серумен албумин

Имобилизираната с BSA агароза се използва за енантиосепарация на триптофан: d - и l-триптофанът са ясно разтворени с помощта на CSP и d-формата е елуирана първо, в съответствие с предишните проучвания за свързване в разтвор. 1 По-късно силикагели и полимери бяха използвани за имобилизиране на BSA като основни материали. Използвани са главно силикагели 24,25, докато използваните полимери са хидроксиетилметакрилатни и поли (стирол-дивинилбензен) перфузионни топчета. 24,25 CSPs, базирани на BSA, са използвани за разделяне на различни киселинни и неутрални енантиомери като N-дериватизирани аминокиселини, ароматни аминокиселини, незаредени разтворени вещества, сулфоксиди и сулфоксиминови производни. 24,25

Смята се, че BSA се състои от 582 аминокиселинни остатъка. Наскоро Hirayama et al. 32 съобщават, че Tyr156 липсва в предишната последователност и че BSA се състои от 583 аминокиселинни последователности. BSA-фрагменти бяха изолирани и имобилизирани върху силикагели. 24 Първо, беше съобщено, че CSP, базирани на BSA-фрагменти, имат по-малък капацитет и енантиоселективност от непокътнатите базирани на BSA CSP, тъй като са по-малко стабилни. Въпреки това, според други доклади, базирани на фрагменти CSP на BSA дават по-висока енантиоселективност за лоразепам и бензоин поради по-свързаните количества и по-ниска енантиоселективност за други тествани съединения в сравнение с непокътнатите базирани на BSA CSP. Тези разлики могат да възникнат както от метода на пречистване, така и от процедурите за обездвижване. По-ниската енантиоселективност може да се дължи на промени в глобуларната структура на BSA-фрагменти или промени в локалната среда около местата на свързване.

Нови технологии за обработка

Том Хуперц,. Хилтън Дийт, в Whey Proteins, 2019

8.2.3.3 Говежди серумен албумин

Установено е, че BSA е доста устойчив на обработка под налягане до 400 MPa (Hayakawa, Kajihara, Morikawa, Oda и Fujio, 1992; López-Fandiño et al., 1996; López-Fandiño, 2006b; Patel et al., 2004; Patel et al., 2005; Patel et al., 2006). Индуцираните от HP промени във вторичната структура на BSA са до голяма степен обратими (Hosseini-nia et al., 2002) и високата стабилност на BSA вероятно е свързана с твърдата молекулярна структура поради наличието на 17 вътремолекулни дисулфидни връзки (Hayakawa et al ., 1992; López-Fandiño et al., 1996; López-Fandiño, 2006b). В

150 MPa, BSA претърпява структурни модификации, което води до увеличаване на молекулния обем (Ceolín, 2000), но тези промени във вторичната структура на BSA са до голяма степен обратими (López-Fandiño, 2006b). Обработката при 800 MPa има съществен ефект върху вторичната структура на BSA и води до полимеризация на BSA чрез дисулфидно свързване, включващо свободния сулфхидрилен остатък (Galazka, Ledward, Sumner и Dickinson, 1997; Galazka, Sumner и Ledward, 1996; Patel, 2007).

Ефекти от обработката под високо налягане върху структурата и взаимодействията на млечните протеини

Hasmukh A. Patel, Thom Huppertz, в Milk Proteins (Второ издание), 2014

Говежди серумен албумин (BSA)

Установено е, че BSA е доста устойчив на обработка под налягане до 400 MPa (Hayakawa et al., 1992; López-Fandiño et al., 1996; Patel et al., 2004; 2005; 2006; López-Fandiño, 2006b). Налични са няколко доклада, обясняващи стабилността на налягането на BSA. Има мнения, че предизвиканите от налягането промени във вторичната структура на BSA са главно обратими (Hosseini-nia et al., 2002) и че по-голямата стабилност на BSA вероятно е свързана с факта, че тази молекула чрез своите 17 вътрешномолекулни дисулфидни връзки и наличието на няколко отделни домена, има изключително твърда структура (Hayakawa et al., 1992; López-Fandiño et al., 1996; López-Fandiño, 2006b). Възможно е относително високият брой дисулфидни връзки в BSA да възпрепятства агрегацията, предизвикана от налягане, като защитава хидрофобното ядро ​​/ групи, намиращи се вътре в молекулата, от излагане на разтворител (Hosseini-nia et al., 2002).

Ceolín (2000) изследва хидродинамичното поведение на BSA, използвайки възмутена ъглова корелационна техника, като функция на високо налягане до 410 MPa. Съобщава се, че при умерено налягане (≈150 MPa) молекулата BSA страда от структурни модификации, които водят до увеличаване на молекулния обем и времето на ротационна корелация на молекулата. Възможно е обаче, за разлика от β-LG, промените във вторичната структура на BSA да са до голяма степен обратими (López-Fandiño, 2006b). Съобщава се обаче, че обработката при 800 MPa има съществен ефект върху вторичната структура на BSA и BSA се полимеризира чрез дисулфидно свързване, включващо свободния сулфхидрилен остатък (Galazka et al., 1996b; 1997; Patel, 2007).

Концептуална основа и биоенергийни/митохондриални аспекти на онкометаболизма

Франк К. Хюйн,. Матю Д. Хиршай, в Методи в ензимологията, 2014

4.2 Приготвяне на 7% BSA/5 тМ студена смес от палмитат

BSA се изисква да действа като носител на палмитат, за да осигури разтворимост на липиди във воден разтвор. Студеният палмитат е включен в реакцията на FAO, за да се увеличи общата скорост на окисление и сигнал, измерен в анализа. За да се приготви разтвор от 7% BSA/5 mM палмитат (

5: 1 моларно съотношение), направете следното:

Пригответе 7,5% разтвор на BSA чрез разреждане на 30% запас (напр. BSA без мастни киселини; Sigma, A9205) в ddH2O. Затопля се до 42 ° C на водна баня. Пригответе 20 ml за 7% разтвор на BSA/5 mM палмитат и 20 ml за 7% разтвор за контрол само на BSA.

Претеглят се 27,8 mg натриев палмитат (Sigma, P9767) и се поставя в 50-милилитрова конична епруветка. Добавете 1,3 ml ddH2O и дръжте капачката затворена, но разхлабена.

Поставете епруветката във вряща водна баня, докато мастните киселини се разтворят (няколко минути).

Охладете палмитата, докато може да се държи с гола ръка, но мастните киселини все още се разтварят (

70 ° С). Ако палмитатът се утаи, тогава отново затоплете.

Веднага добавете 18,7 ml от 7,5% BSA. Поставете във водна баня с температура 42 ° C за 30 минути. За контрола само за 7% BSA добавете 18,7 ml от 7,5% BSA към 1,3 ml ddH2O.

Ако частиците се образуват и са видими с невъоръжено око, обработете с ултразвук за 5 минути. Увеличете температурата до 47 ° C, ако частиците все още присъстват, но не надвишавайте 50 ° C, за да избегнете денатурирането на BSA.

Съхранявайте неизползваните аликвотни части при - 80 ° C за не повече от 6 месеца. Избягвайте цикли замразяване-размразяване.

Съвет: Ако провеждате този анализ за първи път, може да е полезно да промените количеството студен палмитат за реакция, за да намерите идеалната концентрация на общ палмитат за реакция за вашата проба, избрана тъкан и експериментални условия. За целта използвайте 7% разтвор за контрол на BSA, за да регулирате концентрацията на студен палмитат. Типичните концентрации на студен палмитат за тъканни хомогенати и клетки са съответно 0,1–0,5 mM и 0,3–1,0 mM.

Суроватъчни протеини във функционални храни

Ranjan Sharma, в Whey Proteins, 2019

17.2.3 Говежди серумен албумин

BSA е протеин с голямо молекулно тегло, който съставлява приблизително 10% от общия суроватъчен протеин в млякото. Поради своя размер и по-високи нива на структура, BSA може да свързва свободни мастни киселини и други липиди, както и ароматични съединения; тази функция обаче е сериозно затруднена при денатурацията (Kinsella & Whitehead, 1989). Подобно на други млечни протеини, BSA е източник на незаменими аминокиселини, но приложението му във функционални храни не е изследвано. Има ограничени проучвания, изследващи терапевтичния потенциал на BSA (Krissansen, 2007). Laursen, Briand и Lykkesfeldt (1990) показват, че няколко търговски BSA препарати имат инхибиторен потенциал за растежа на човешката клетъчна линия на рак на гърдата, MCF-7. Доказано е, че серорфинът (Tyr-Gly-Phe-Gln-Asn-Ala) (f399–404), пептид от BSA, има опиоидна агонистична активност (Meisel, 2005). Установено е, че друг пептид на BSA, албутензин А или серокинин (Ala-Leu-Lys-Ala-Trp-Ser-Val-Ala-Arg) (f208–216), е ACE-инхибитор и се съобщава, че има илеум- договаряне и илеум-релаксиращи дейности (Meisel, 2005).

Преглед на биополимерните наноструктури за капсулиране на хранителни съставки

4.1.6 Наночастици от говежди серумен албумин (BSA)

Говеждият серумен албумин (BSA) се прилага широко при доставката на лекарства поради ниската си цена и поносимост, както и опростената подготовка. Структурните характеристики на BSA, който има разнообразие от аминокиселинни остатъци, позволяват свързването на лекарства или биоактивни съединения с различни физикохимични характеристики. BSA е най-разпространеният плазмен протеин при говедата и се състои от единична верига от 583 аминокиселинни остатъка.

Различни методи за приготвяне и характеризиране на биоактивно натоварени наночастици BSA и някои скорошни примери за приложения на BSA за доставка на хранителни биоактивни компоненти са обяснени в глава 7 .

Взаимодействия между протеин и вкус

А. Тромелин,. Е. Гичард, в „Аромат в храната“, 2006 г.

Говежди серумен албумин (BSA)

BSA е описан като глобуларен негликопротеин с молекулно тегло близо 66 430. Той е направен от 583 аминокиселинни остатъка и има 17 цистинови остатъка (8 дисулфидни моста и 1 свободна тиолова група) (Carter and Ho 1994, Hirayama et al (1990). Мастните киселини се свързват с BSA, вероятно чрез хидрофобни взаимодействия, като карбонилната група играе само второстепенна роля в това взаимодействие (Burova et al. 1999 и цитирани референции; Morrisett et al. 1975, Spector 1975) и полиненаситени алдехиди, получени от полиненаситените киселини, които вероятно реагират с остатъци от лизин, за да образуват адукти на Shiff base чрез ковалентни връзки (Refsgaard et al. 2000).

Установено е обаче, че BSA свързва карбонилни съединения с висок афинитет (Damodaran и Kinsella 1980b, Jasinski и Kilara 1985), предизвикващи конформационни промени в протеина. Химичната редукция на дисулфидни мостове на BSA намалява афинитета му към карбонилни съединения.

Афинитетът на свързване се влияе от дължината на веригата, функционалната група и структурното състояние на протеина (Damodaran и Kinsella 1980b). Всъщност в BSA са съобщени около 21 места на свързване и изглежда, че пет до шест първични места на свързване участват в свързването на карбонил (Jasinski и Kilara 1985). По-скорошното разследване на освобождаването на 2-октанон, свързан от BSA/пектинови комплекси, разкрива, че при условия на слабо привлекателно взаимодействие между BSA и пектин (при pH 6,4) 2-октанонът е свързан предимно от BSA, докато е свързан както от BSA, така и от пектин при условия на силно междубиополимерно взаимодействие при pH 4.3, което предполага конкурентно свързване на BSA и 2-октанон с полизахаридната матрица (Burova et al. 1999). Ванилинът взаимодейства с BSA по-силно, отколкото с казеинат, чрез водородна връзка и хидрофобни взаимодействия, като хидрофобните взаимодействия изглеждат по-важни (Chobpattana et al. 2002).

Изследвана е ролята на малките лиганди по отношение на термичните и pH условията в процеса на денатурация на BSA. По този начин са изследвани взаимодействията на 2-октанон и ванилин (един алифатен и един ароматен одорант) с използване на естествен, кисел и термично денатуриран BSA. Получените експериментални данни изглежда отразяват обратима пластификация на сърцевината на протеина чрез ароматни лиганди. Изглежда, че състоянието на пластифицирана глобула е доста подобно на състоянието на разтопена глобула на протеините и основната разлика между естествената протеинова молекула и състоянието на разтопена глобула се дължи на нарушаването на хидрофобните взаимодействия, докато състоянието на пластифицираната глобула съответства на разреждането на хидрофобната сърцевина от липофилен пластификатор (Burova et al. 2003). Ролята както на хидрофобните, така и на електростатичните взаимодействия беше подчертана чрез изследване на свързването на 7,8-дихидроксикумарин (Daphnetin) с BSA (Liu et al. 2004).

Млечни протеини: незначителни протеини, говежди серумен албумин и витамин-свързващи протеини и техните биологични свойства

Говежди серумен албумин

BSA е протеин, който се намира предимно в кръвоносната система на кравата, но също така е съставна част на суроватъчния компонент на говеждото мляко. BSA има молекулно тегло 66 433 Da (583 аминокиселини) и се смята, че се намира в млякото поради влошаване на стегнатите връзки между епителните клетки на млечната жлеза, които ограничават движението на молекулите от кръвта до отделението за секретар на говедата млечна жлеза. Това наблюдение се засилва с различните доклади за идентифициране на повишени концентрации на BSA в говеждо мляко, съвпадащи с мастит и съответния имунен/възпалителен отговор и повишената концентрация на BSA в отговор на промените в честотата на доене (например от два пъти/ден до веднъж дневно доене), за което е доказано, че влияе върху целостта на целостта на епителните клетки на млечната жлеза.

BSA в говеждото мляко също е замесен в алергичните реакции при хората към говеждо мляко и дори е изследван като възможна причина за стимулиране на автоимунно заболяване, водещо до инсулинозависим захарен диабет при хората.