1 Катедра по клинична лаборатория, болница Минханг, Университет Фудан, № 170 XinSong Road, Шанхай 201199, Китай

микроби

2 Катедра по акушерство и гинекология, болница Minhang, Университет Fudan, № 170 XinSong Road, Шанхай 201199, Китай

Резюме

Заден план. Високорисковата инфекция с човешки папиломен вирус (hr-HPV) е необходима причина за рак на маточната шийка. Въпреки това, други често срещани микроби от долния генитален тракт могат да увеличат hr-HPV инфекцията и свързаната с тях цервикална цитопатия. Методи. За потвърждаване на тази хипотеза са взети проби от цервикална четка и вагинални тампони от 826 възрастни пациенти, които са разделени на hr-HPV-положителна група (254) и отрицателна група (572) чрез PCR анализ в реално време. Тествани са образци на маточната шийка Ureaplasma parvum (НАГОРЕ), Ureaplasma urealyticum (UU) и Chlamydia trachomatis (CT) с помощта на PCR анализ. Установена е вагинална секреция за Trichomonas vaginalis (Телевизия), Кандида spp., и бактериална вагиноза (BV) с конвенционален анализ. Резултати. Сред hr-HPV-позитивните жени UP е установено при 51,6%, UU при 15,4%, CT при 15,7%, Кандида spp. в 11,0%, телевизия в 3,1% и BV в 20,5%. В hr-HPV-отрицателната група UP беше положителен при 36,2%, UU при 8,6%, CT при 4,0%, Кандида spp. в 12,4%, телевизия в 0,2% и BV в 7,0%. Многовариантният логистичен регресионен анализ с коригиране на възрастта показа, че UU (OR, 1.757), UP (OR, 1.804), CT (OR, 3.538), BV (OR, 3.020) и TV (OR, 14.109) са рискови фактори за hr -HPV инфекция (

). Заключение. Тези микроби могат да предизвикат хронично възпаление на шийката на матката, което би увредило лигавичната бариера и имунната защита, за да насърчи инфекцията на hr-HPV.

1. Въведение

2. Проучване дизайн

2.1. Избор на теми

Общо 826 жени пациенти, които са посещавали амбулаторната клиника на болница Minhang, Fudan University (Шанхай, Китай), в периода от януари до май 2019 г. са били включени в това проучване. Подборът на участниците се извършва чрез последователно вземане на проби. Критериите за включване бяха следните: жените имаха сексуален опит; на възраст между 20 и 70 г. Критерии за изключване са бременност, дисплазия на долните полови органи или злокачествено заболяване, анамнеза за рак на маточната шийка, лекувани са с вагинални лекарства през предходните 3 дни и други остри или хронични негинекологични заболявания [8, 9]. Това проучване е одобрено от Комитета по етика на болница Минханг, Университет Фудан. Получено е писмено информирано съгласие от всички участници.

2.2. HPV-ДНК тест

Ексфолираните клетки на шийката на матката се събират с помощта на циточетката и се поставят в 2 ml течна цитологична среда (Jianyou Medical Tech Co. Ltd, Jiangsu, China). Отворът на матката ще се почиства със стерилен памучен тампон, когато има прекомерна слуз и ексудати. Образците бяха извлечени и открити за hr-HPV ДНК, използвайки системата cobas® 4800 (Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, USA), която напълно автоматизира подготовката на пробите и усилването на 14 hr-HPV в реално време с полимеразна верижна реакция (PCR). L1 гени (HPV-16, -18, -31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66 и -68). Сондите TaqMan бяха етикетирани с 4 различни флуоресцентни багрила за HPV-16, HPV-18, останалите 12 часа-HPV и човешкия β-глобинов ген, съответно. Човекът β-генът глобин е използван за мониторинг на целия процес на откриване като качествен контрол [10].

2.3. Откриване на BV, TV и Кандида spp

Пробите от вагинални тампони се събират от задния вагинален форникс и се поставят в 0,5 ml стерилен физиологичен разтвор. Телевизор и Кандида spp. са открити с помощта на микроскопско изследване (100 × и 400 ×) в рамките на 15 минути. [11] Кандида spp. пъпки клетки и хифи са открити чрез оцветяване по Грам. BV е диагностициран въз основа на критериите на Nugent, като се използват резултатите от оцветена по Грам слайд [12]. Резултат по Nugent ≥7 се определя като BV. Всички проби бяха оценени независимо от двама опитни цитотехнологии и крайните резултати бяха установени въз основа на консенсус и на двамата.

2.4. Откриване на UU, UP и CT ДНК

Взети са образци на маточната шийка за откриване на UU, UP и CT гени. CT ДНК се екстрахира чрез комплекти за екстракция на геном и се усилва чрез PCR комплекти в реално време в съответствие с инструкциите на производителя (Fosun Pharma Co. Ltd, Шанхай, Китай). Откриването на UU и UP се извършва с помощта на предварително публикуван PCR анализ в реално време, описан от Liu et al. [13]. За да се предотврати замърсяването на амплифицираните продукти, бяха използвани dUTP и UNG (урацил-N-гликозилаза) ензими. В допълнение беше извършен екзогенен вътрешен контрол на процеса (глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназен ген) за наблюдение и избягване на „фалшиво отрицателните“ резултати, причинени от PCR инхибитори в пробата.

2.5. Статистически анализ

Всички статистически анализи бяха извършени с помощта на софтуера R версия 3.5.1. Възрастите на пациентите са изразени като средно ± стандартно отклонение (SD), като разликите са тествани от т-тест. Разпространението на Hr-HPV сред различните възрастови групи се анализира с хи-квадрат (χ 2) тест. Използвана е многовариативна логистична регресия, за да се определи корелацията на hr-HPV инфекцията и други микроорганизми (UU, UP, CT, Кандида spp., TV и BV). За изчисляване на риска са използвани суровото относително съотношение на риска (OR) със съответните 95% доверителни интервали (CI) и коригираното с възрастта относително съотношение на риска. Стойност

значителна разлика като

3.2. Разпространение на Hr-HPV и други микроби от долния генитален тракт

От 826 жени, hr-HPV е открит при 254. Генотиповете са показани, както следва: HPV-16 е положителен при 97 (11,7%), HPV-18 при 22 (2,7%), а останалите 12 hr-HPV генотипове при 135 (16,3%). НАГОРЕ, UU, CT, Кандида spp., TV и BV са положителни при 338 проби (40,9%), 88 проби (10,7%), 63 проби (7,6%), 99 проби (12,0%), 9 проби (1,1%) и 92 проби (11,1 %), съответно. Сред горните микроби на долния генитален тракт UP е най-често срещаният ().

3.3. Коинфекция на Hr-HPV и други микроби от долния генитален тракт

В hr-HPV-положителната група UP е установено при 51,6%, UU при 15,4%, CT при 15,7%, Кандида spp. в 11,0%, телевизия в 3,1% и BV в 20,5%. Сред hr-HPV-отрицателните жени UP е присъствал при 36,2%, UU при 8,6%, CT при 4,0%, Кандида spp. в 12,4%, телевизия в 0,2% и BV в 7,0% (таблица 2). Преобладаването на UP, UU, CT, TV и BV в hr-HPV-положителната група е значително по-високо от това в HPV-отрицателната група (). Но разпространението на Кандида spp. не се различава съществено между двете групи (). Данните бяха оценени с помощта на многовариатен логистичен регресионен анализ, който беше коригиран само за възрастта. И показа, че UU (OR, 1.757), UP (OR, 1.804), CT (OR, 3.538), BV (OR, 3.020) и TV (OR, 14.109) са рискови фактори за инфекция с hr-HPV ().

Значителна разлика като

4. Дискусия

Кривата на разпространението на възрастта показва, че hr-HPV инфекциите достигат пик първо при жени на възраст под 30 години, а след това намаляват с напредване на възрастта, но кривата отново се повишава на възраст 50 години и достига връх на възраст 60 години или повече. Подобно беше и с докладите на Herrero et al. [16]. Първият пик при най-младите жени може да бъде свързан с високата сексуална активност или многобройните полови партньори. Много изследователи установиха, че повечето HPV инфекции стават неоткриваеми в рамките на 1-2 години. Предполага се, че вирусът се е изчистил от клетъчния имунитет на гостоприемника или е бил потиснат в дългосрочна латентност [16, 17]. Вторият преобладаващ пик е при жените в постменопауза, което не е отбелязано от други изследователи. Може би защото данните им не включват достатъчно възрастни жени. Възможното обяснение за втория пик би било, че възрастните жени са били изложени по-интензивно на HPV, намален имунен клирънс и реактивиране на латентна HPV инфекция [16]. Бъдещите проучвания трябва да се фокусират върху маркери за имунна супресия, тестове за активиране на латентен HPV и сексуална практика на възрастни жени и техните партньори от мъжки пол.

Да се ​​изследва корелацията между често срещаните микроби на долния генитален тракт и HPV инфекция, UU, UP, CT, TV, Кандида spp., и BV са открити в 826 шийни и вагинални екземпляра. С изключение Кандида spp., всички тези микроби показват по-високо разпространение при HPV-позитивни жени, отколкото HPV-отрицателни жени. Множественият регресионен анализ показва, че UU, UP, CT, TV и BV са рискови фактори за hr-HPV инфекция.

Връзката между CT и HPV инфекцията е установена от други. Нашите данни също така разкриват около 4 пъти по-висок риск от инфекция с hr-HPV при CT-позитивни жени в сравнение с CT-отрицателна група, което показва необходимостта от скрининг и лечение на CT при hr-HPV-позитивни жени. Предполага се, че CT инфекцията може да увеличи чувствителността на шийката на матката към HPV чрез възпаление и епителна цитопатия, като по този начин улеснява навлизането на вириони; като се има предвид, че имунният отговор е от решаващо значение за изчистването на HPV инфекцията. Хроничното възпаление на шийката на матката може да намали медиирания от имунитета на гостоприемника чрез повишаване на производството на свободни радикали, което изглежда е благоприятно за устойчивостта на HPV [8]. CT инфекцията е демонстрирана като проблем за общественото здраве, който може да увреди лигавичната бариера, да позволи на HPV да проникне в базалния епител, да повлияе имунния отговор и да увеличи инфекцията на HPV и риска от канцерогенеза [24]. Някои предишни проучвания са потвърдили повишена CT инфекция и коинфекция на CT с HPV при сексуално активни жени. Освен това жените с CT инфекция са имали почти двукратна продължителност на hr-HPV инфекция, осигурявайки допълнителна подкрепа за корелацията между CT и HPV персистиране [6, 8, 24].

Съобщава се, че телевизията може да предизвика възпаление в цервиковагиналния епител, да наруши целостта на епитела, да улесни достъпа на вируса до подлежащите слоеве и да доведе до персистираща HPV инфекция [25]. Ghosh и сътр. [26] установи, че жените, заразени с TV и hr-HPV, имат по-висок риск от инвазивен рак на маточната шийка. Също така, значителна връзка между HPV-16 и TV е разкрита от изследване върху 324 пациенти от провинция Танзания. Жените, заразени с телевизия, са били 6,5 пъти по-склонни да получат HPV-16 в сравнение с жените без телевизия (50% срещу 13,3%) [27]. Нашите данни също така установяват 14.109 пъти повишен риск от инфекция с hr-HPV при TV-позитивни жени, отколкото TV-отрицателни, показвайки силна корелация между TV и 14 hr-HPV инфекция с генотипове.

В това проучване беше установено, че BV също е свързано с hr-HPV инфекция. Това беше в съответствие с докладите на Zhang et al. [9] BV се характеризира като промени във вагиналната флора: намаляване на Лактобацилус spp. и едновременно увеличаване на факултативните анаероби или анаеробни бактерии, включително Гарднерела вагиналис, Превотела видове, и Порфиромонас видове. BV може да повлияе на цитокини и хемокини, антимикробни протеини и популации на имунни клетки във влагалището, което води до увреждане на тъканите и повишаване на онкогенния потенциал на HPV [28]. И според King et al., [29] изчистването на HPV се забавя сред жените, които са имали BV, което води до нарастващите HPV събития. Впоследствие се развиха цервикална дисплазия и неопластични лезии. Също така те демонстрираха, че BV, независимо от предишната или настоящата инфекция, е свързана с инцидентни HPV инфекции. Тъй като BV може да доведе до големи промени във вагиналната среда и да причини вродена деградация на защитните сили, беше правдоподобно да се обърне внимание на нарушената бактериална екологична система, за да се контролира честотата на HPV и цервикалната канцерогенеза.

В заключение, високото разпространение на UU, UP, CT, TV и BV е установено при hr-HPV-позитивни жени, които са показани като рискови фактори за hr-HPV инфекции. Тези микроби от долния генитален тракт могат да предизвикат възпаление на шийката на матката, да увеличат генерирането на свободни радикали, да увредят епителната бариера на шийката на матката и да намалят имунния клирънс, така че да насърчат инфекцията на hr-HPV. Може да е полезно скринингът на тези микроби при възрастни жени.

Наличност на данни

Данните, използвани в подкрепа на констатациите от това проучване, са достъпни от съответния автор при поискване.

Етично одобрение

Това проучване е одобрено от Комитета по етика на болница Минханг, Университет Фудан.

Конфликт на интереси

Авторите не декларират конфликт на интереси.

Приноси на авторите

PPL и ZZ допринесоха за дизайн на проучването, събиране на данни, придобиване на финансиране и подготовка на ръкописи. FZ и XQX бяха отговорни за статистическия анализ. JX отговаряше за събирането на данни. QW отговаряше за курирането на данни. Всички автори прочетоха и одобриха окончателния ръкопис.

Благодарности

Авторите благодарят на Шилонг ​​Джанг (Централна лаборатория, болница Минханг, Университет Фудан, Китай) за неговото съдействие при статистическия анализ. Тази работа беше подкрепена от Националния план за научноизследователска и развойна дейност в областта на високите технологии (2015AA021107-035), болница Minhang, проект на университета Fudan (2018MHJC04) и изследователски проект на област Minhang за естествени науки (2019MHZ100).

Препратки