Омар Саид

1 Център за билколечение Antaki Ltd, Kfar Kana 16930, Израел

2 Регионален център за научноизследователска и развойна дейност, Общество „Галилея“ и Изследователски център „Касеми“, Академичен колеж „Ал-Касеми“, П.О. Box 2205, Baga Algharbiya 16930, Израел

Башар Саад

2 Регионален център за научноизследователска и развойна дейност, Общество „Галилея“ и Изследователски център „Касеми“, Академичен колеж „Ал-Касеми“, П.О. Box 2205, Baga Algharbiya 16930, Израел

3 Факултет по съюзни медицински науки, Арабско-американския университет Дженин, Дженин, Палестина

Стивън Фулдър

1 Център за билколечение Antaki Ltd, Kfar Kana 16930, Израел

Халед Халил

1 Център за билколечение Antaki Ltd, Kfar Kana 16930, Израел

Ели Касис

4 Sprunk-Jansen, A/S Strandvejen 100, 2900 Hellerup, Дания

Резюме

1. Въведение

Наднорменото тегло е основно здравословно предизвикателство в западния свят със сериозни клинични усложнения като захарен диабет тип 2, мозъчно-съдови и исхемични сърдечни заболявания. Наличната фармакологична терапия на затлъстяването е ограничена до анорексични лекарства като амфепрамон и сибутрамин и едно малабсорбиращо лекарство, орлистат. При добавяне към диета такава терапия се очаква да доведе до загуба на тегло от 0,2–0,4 kg седмично -1, но само за няколко седмици поради толерантност и странични ефекти [1].

По този начин и четирите растения се използват в европейската билкария и всяко с различно указание за употреба. Предположихме, че тези четири растения, когато се комбинират, могат да генерират синергичен ефект. Настоящото проучване има за цел да изследва безопасността и терапевтичната ефикасност на фиксирана смес от тези четири растения. Що се отнася до безопасността, извършихме in vitro и проучвания върху животни. Що се отнася до терапевтичната ефикасност, ние я определихме като постепенна и постоянна загуба на тегло през периода на изследване от 4 седмици в проучването с контролирани животни и от 3 месеца в откритото проучване при хора.

2. Материали и методи

Листата на дамската мантия, маслината и дивата мента, както и семената от кимион бяха събрани от района на Галилея, изсушени под сянка и на прах до фин клас като екстракти от лабораториите на Антаки ООД, Кфар Кана, Израел. Таблетките с тегло (310 mg таблетка -1) се приготвят в лаборатории Karmat Micro Encapsulation, Kibbutz Ramot Menashe, Израел. Всяка таблетка съдържа 60 mg A. vulgaris L., 50 mg O. europaea L., 20 mg Mentha longiforia L., 25 mg C. cyminum L., 7 mg витамин С и 148 mg трикалциев фосфат.

2.1. Анализ на безопасността и оксидативния стрес

Плъхове и хомогенати от черен дроб на плъхове са използвани за оценка на безопасността и антиоксидантните ефекти на Weighlevel.

2.1.1. LD50

Тридесет и шест мъжки плъха Sprague-Dawley (средно тегло: 153 ± 12 g) бяха разделени в четири групи. Големи единични дози Weighlevel се поставят директно в стомаха на всяка група и се наблюдават в продължение на 14 дни, за да се определи LD50. Одобрението за изследване на животни е дадено от Факултета по медицина в Технион, Хайфа, през 1999 г.

2.1.2. Оксидативен стрес

Оксидативният стрес води до генериране на реактивни кислородни видове (ROS), които играят важна патогенетична роля при различни болестни състояния. Липидната пероксидация има вредни ефекти върху мембраната на чернодробните клетки. Степента на пероксидация на липидите беше измерена с помощта на техника, базирана на анализ на реактивно вещество с тиобарбитурова киселина (TBARS), която открива малондиалдехид (MDA), краен продукт от пероксидативно разлагане на полиеонни мастни киселини в in vitro системи [15]. За да се определи точно TBARS в аналитичната процедура, протеинът се утаява преди добавянето на тиобарбитурова киселина към реакцията, докато антиоксидантът бутилиран хидрокситолуен се добавя преди нагряване на пробите. Хомогенатите от черен дроб на плъх бяха инкубирани със 100 μM FeSO4 като ROS генерираща система [16, 17] и с различни концентрации на продукта.

2.1.3. Анализ на лактат дехидрогеназа

Освобождаването на вътреклетъчния ензим лактат дехидрогеназа (LDH) е следствие от некротично или токсично разкъсване на клетъчната мембрана. Целостта на клетъчната мембрана се определя чрез измерване на LDH активност, освободена в хранителната среда [18, 19]. LDH активността се наблюдава след окисляването на NADH като намаляване на абсорбцията при 334 nm. Реакцията се провежда в калиев фосфатен буфер (40 mM K2HPO4, 10 mM KH2PO4, рН 7,5), съдържащ 0,24 mM NADH и 0,62 mM пируват. Процентът на освободен LDH се определя като съотношението на LDH активност в супернатантата към сумата на освободеното количество LDH плюс LDH активност, измерена в клетъчния лизат. Човешките фибробласти се инкубират с различни количества от екстрактите на продукта и LDH активността се измерва в средата при 24, 48 и 72 часа инкубация.

2.1.4. Термогенеза

Мъжките плъхове Sprague-Dawley (n = 12) бяха настанени в стая с контролирана светлина и температура (12:12 h светлина: тъмен цикъл и 23 ° C) и им беше предоставен безплатен достъп до вода и стандартна лабораторна диета за едноседмична адаптация период, преди започване на проучването. Ленти от интерскапуларна кафява мастна тъкан (IBAT) бяха бързо разчленени от средната част на мастната подложка. Тъканите бяха перфузирани с бикарбонатен буфер на Krebs-Ringer със следния състав: 116,8 mM NaCl, 25 mM NaHCO3, 5,9 mM KCl, 1,2 mM MgSO4, 1,2 mM NaH2PO4, 1,25 mM CaCl2 и 5 mM глюкоза. Екстрактът от Weighlevel се добавя в перфузионната буферна среда и получената суспензия се филтрира автоматично, преди да влезе в дихателните камери. Средата се барботира непрекъснато със смес от 95% O2 и 5% CO2 [20, 21]. Честотата на дишане на фрагментите на IBAT се измерва по метод, включващ многократни определяния на поглъщане на O2, както е описано от Barde et al. [22]. Парциалното налягане на O2 (PO2) беше измерено с електрод на Clark O2, когато администрирането на екстракта доведе до промени в MO2 [23-25].

2.1.5. Ефикасност при пилета

В първата фаза на нашето проучване бяха използвани пилета (средно тегло около 100 g всяко), тъй като те представляват проста и бърза система за тестване. Пилетата бяха обгрижвани при стандартни условия и хранени в продължение на 1 месец с нормална храна за пилета (n = 20), с нормална храна, обогатена с 10% Nigella sativa (n = 20) и с нормална храна, обогатена с 3% от праха на продукта (n = 20). Теглото на тялото се оценява внимателно всяка седмица.

2.1.6. Клинични изследвания

2.2. Статистика

Използван е тестът на Wilcoxon с подписан ранг. Сравненията между групите бяха извършени чрез теста на Wilcoxon rank-sum. Беше определено ниво на значимост 0,05. Получените данни са изразени като средна стойност ± SEM.

3. Резултати

3.1. Анализ на безопасността

Необходима е изключително висока доза Weighlevel (15,3 g kg -1), за да се получи LD50 при плъхове. В зависимост от телесното тегло това би съответствало на консумацията от човека на повече от килограм. Подобни резултати са наблюдавани при in vitro проучвания чрез измерване на освобождаването на LDH. Фигура 1 показва резултатите за 24, 48 и 72 часа инкубация. В сравнение с нетретираните контролни клетки не е установена значителна промяна в освобождаването на LDH, независимо дали като функция от увеличаване на концентрацията на продукта или като функция от увеличаване на инкубационния период.

отслабване

Освобождаване на LDH от култивирани човешки фибробласти. Освобождаването на LDH се оценява 24, 48 и 72 часа в контролни клетки и третирани с Weighlevel клетки (180 и 360 mg ml -1). Дадените стойности представляват средната стойност ± SEM от три независими експеримента, проведени в три екземпляра.

3.2. Антиоксидант

Липидната пероксидация, индуцирана чрез инкубиране на хомогената на черния дроб на плъх с феросулфат, е изразена на Фигура 2 като степен на производство на MDA. Добавянето на много ниска доза от продукта (10 μg ml -1) към средата значително намалява освобождаването на MDA от 0,89 ± 0,05 до 0,53 ± 0,03 nM mg -1 протеин (P -1) допълнително намалява концентрацията на MDA до 0,28 ± 0,03 nM mg -1 протеин (P -1 (фигура 2).

Ефекти на екстракта от Weighlevel, различен върху освобождаването на MDA от хомогенати от черен дроб на плъх, инкубирани със 100 μM феросулфат в присъствието и отсъствието на 0,01, 0,05 и 0,1 mg Weighlevel ml -1. Дадените стойности представляват средната стойност ± SEM от три независими експеримента, проведени в три екземпляра.

3.3. Против наднормено тегло

Ефектите на термогенезата на Weighlevel са определени в ленти от IBAT на плъх. Дадените стойности представляват средната стойност ± SEM от три независими експеримента, проведени в три екземпляра.

3.5. Клинични изследвания

Средната възраст на 80 субекти, наети в проучването, е 34,3 ± 9,68 (диапазон 19-53) години. Те имаха средно тегло 90 ± 5 kg и височина 169 ± 5 cm, съответстваща на ИТМ 31,3 ± 1,1 kg m - 2. Жените са съставлявали 48% от субектите с възрастови граници 49–67 години. Почти половината от всички субекти са били на някои лекарства главно за исхемична болест на сърцето, захарен диабет и/или хипертония. Всички лекарства са запазени непроменени през периода на проучването, тъй като пациентите са в стабилно клинично състояние. Четиринадесет субекта бяха изключени, тъй като нарушиха протокола, осем поради липса на съответствие и шест поради отсъствие от планирани посещения. Следователно, ефикасността и поносимостта са дадени за останалите 66 субекта.

Нивото на тежестта се понася добре при всички 66 пациенти и никой от тях не отбелязва незначителен или голям неблагоприятен ефект. Продуктът се понася добре с други лекарства за захарен диабет, хипертония, холестерол и исхемична болест на сърцето. Фигура 5 обобщава ефикасността на Weighlevel при тези 66 субекта. Наблюдавани са значителни и прогресивни намаления на теглото всеки месец, средно 1 kg седмично -1 за 3 месеца. Теглото е намалено от изходното ниво на 90,5 ± 1,2 на 78,5 ± 1,4 kg за 3 месеца (P - 2 (с наднормено тегло) (Фигура 5 (а)) в сравнение с хората с ИТМ> 30 kg m - 2 (със затлъстяване) (Фигура 5 ( b)). ИТМ е намален след 3 месеца от 28,5 ± 1,2 и 32,1 ± 1,8 kg m - 2 на 24,5 ± 1,4 и 27,5 ± 2,2 kg m - 2, съответно при групи с наднормено тегло и затлъстяване. контролна група, която беше помолена да го ограничи до три основни хранения (Фигура 5 (в)).

Проучвания за клинична ефикасност на Weighlevel при 66 доброволци, избрани въз основа на рутинни посещения при общопрактикуващите лекари в пет различни клиники в Галилея, където са попитани дали желаят да предприемат билкова терапия за отслабване. Хората бяха разделени на три групи. Първата група с ИТМ от 25–30 kg m - 2 (a), втората група с BMI> 30 kg m - 2 (b) и контролната група (c). Дадените стойности представляват средната стойност ± SEM.

4. Дискусия

Понастоящем практикуваната традиционна арабско-ислямска билкова медицина е силно недостатъчно използвана, въпреки че може да предостави ефективни нови концепции и богат източник на активни билкови съединения. Според нашите познания понастоящем няма арабски програми за обучение по традиционна медицина в никоя арабска държава и арабската медицина не се е превърнала в цялостна здравна алтернатива, сравнима с други незападни здравни модели. Според неотдавнашни проучвания в Средиземноморския регион се срещат над 2600 растителни вида и около 200–250 растения са отбелязани за употребата им като лечебни билки [26–28]. Ново проведено етнофармакологично проучване от нашата група разкри, че в нашия регион все още се използват над 450 растителни вида (Said O., Khalil K. и Saad B., непубликувани данни). В настоящото проучване подготвихме комбинация от четири билкови лекарства, които традиционно са известни със своите ефекти на намаляване на теглото. Тази комбинация се нарича Weighlevel.

Препоръчителната официална доза на A. vulgaris L., основното лечебно растение във Weighlevel, е 5–10 g дневно -1 сушено растение [7]. Показахме високо ниво на безопасност на Weighlevel. Токсичността, както е определена от LD50 при плъхове, се наблюдава само при високи концентрации от ~ 5 g kg -1. Концентрациите до 360 mg ml -1 не показват никакви признаци на клетъчна токсичност при LDH теста. И все пак, антиоксидантните свойства се доказват при концентрации до 0,01 mg ml -1 и са по-значими при концентрации 0,05 mg ml -1. По-високите концентрации не допринасят съществено за такива свойства. Тези наблюдения, които показват много висок терапевтичен индекс (разликата между ефективните и токсичните дози), могат да обяснят липсата на някакъв неблагоприятен ефект при изследваните пациенти.

Клиничните резултати разкриват, че Weighlevel е безопасен и се понася добре от всички 66 субекти и е терапевтично ефективен, тъй като загубата на тегло при всеки субект е нарастваща и стабилна през периода на изследване от 3 месеца.

Както има опит в клиничната практика, по-малките дози синергични лекарства могат да доведат до по-добра терапевтична ефикасност с по-малко странични ефекти. В момента наличните фармацевтични лекарства, когато се добавят към диета, се очаква да доведат до загуба на тегло от 0,2-0,4 kg седмично -1 [1]. В настоящото проучване всички субекти бяха помолени да продължат обичайните си навици да приемат храна, но да приемат само три основни хранения дневно, без закуски между тях. Наблюдавахме загуба на тегло от ∼1 kg седмично −1 през всяка от 12-те учебни седмици, като по този начин намалявахме средното индивидуално тегло с ∼12 kg за 3 месеца. Изключването на 14 субекта се дължи на липсата на съответствие, а не на липсата на ефикасност.

Както се вижда от контролираните проучвания при пилета, намаленото наддаване на тегло е значително през 4 седмици в изследваната група. Това би могло да отрази токсичния ефект на Weighlevel при тези пилета. И трите групи пилета, които са били хранени с еднакво качество и количество нормална храна за пилета, са били очевидно здрави преди и по време на четирите учебни седмици и всяко пиле от трите групи обикновено е увеличило теглото си. Въпреки това, наддаването на тегло в положителната контролна група не е значително над това в контролната група, докато е било значително по-малко в изследваната група. Следователно изглежда по-вероятно наблюдаваните ефекти на Weighlevel при тези пилета да се дължат на увеличено и удължено време на ситост и усещане за пълнота заедно с увеличена базална скорост на метаболизма.

Предполагаме, че комбинацията от четирите растения във Weighlevel действа за повишаване на ситостта и термогенезата в кафявите адипоцити чрез измерване на термогенезата при мъжки плъхове Sprague-Dawley. Тази система е общоприета като модел за изчерпване на мазнините (изгаряне на мазнини). Амините на A. vulgaris L. са главно танините, за които се съобщава, че повишават скоростта на метаболизма в студена среда [11], а флавоноидите регулират храносмилателните ензими и имат кардиопротективни ефекти [29]. Освен метаболитна стимулация [12], е показано, че екстрактите от маслинови листа инхибират чревната абсорбция на глюкоза и се отчита хипогликемичен ефект заедно с хипотензивни и хиполипидемични свойства [30–32]. По този начин е известно, че маслиновите листа намаляват натоварването на мазнините и нивата на мазнини в кръвообращението. Съобщава се, че дивата мента отпуска стомаха и увеличава изпразването на стомаха и преминаването на храната през храносмилателната система [33]. Съобщава се също така, че кимионът подобрява усвояването на глюкозата, намалява повишената кръвна захар и насърчава храносмилането чрез стимулиране на стомашно-чревната лигавица и храносмилателните ензими на панкреаса [34, 35].

В допълнение към ефектите от наднорменото тегло на нашата растителна комбинация се наблюдава положителна и желана антиоксидантна активност. Това откритие е от голямо значение за хората, страдащи от затлъстяване, които обикновено имат високи нива на оксидативен стрес. Въз основа на тези констатации и като вземем предвид възможността за ограничаване на ефективността с времето, бихме насърчили по-нататъшни изследвания в световен мащаб, по-специално многоцентрово открито проучване при изключително затлъстели субекти. Очаква се загуба на тегло от –0–50 kg по време на 1 година приложение на Weighlevel три пъти дневно и 30 минути преди всяко основно хранене.