Ида Давуди

факултет по фармация, Техерански университет по медицински науки, Техеран, Иран

Роджа Рахими

b Катедра по традиционна фармация, Факултет по традиционна медицина, Техерански университет по медицински науки, Техеран, Иран

Мохамад Абдолахи

c Факултет по фармация и изследователски център за фармацевтични науки, Техерански университет за медицински науки, Техеран, Иран

Fatemeh Farzaei

d Изследователски център по медицинска биология, Университет по медицински науки Керманшах, Керманшах, Иран

Мохамад Хосеин Фарзай

e Изследователски център за фармацевтични науки, Университет по медицински науки Керманшах, Керманшах, Иран

f Група по интереси по фитофармакология (PPIG), Универсална мрежа за научно образование и изследвания (USERN), Керманшах, Иран

Захра Мемариани

g Училище за иранска традиционна медицина, традиционна медицина и история на медицинските науки Изследователски център, Babol University of Medical Sciences, Babol, Iran

Фариба Наджафи

h Университет по медицински науки Керманшах, Керманшах, Иран

Резюме

NAFLD е хронично чернодробно заболяване, което засяга голям дял от световното население, което причинява метаболитни и чернодробни увреждания. Rosa damascena Mill се използва традиционно като хранителна добавка при чернодробни заболявания. Това проучване е проведено за определяне на благоприятния ефект на стандартизирания екстракт от R. damascena върху животински модел на безалкохолна мастна чернодробна болест (NAFLD). NAFLD се индуцира чрез диета с високо съдържание на мазнини (HFD) при плъхове Wistar. Плъховете с HFD показват увеличение (p Ключови думи: Мастен черен дроб, Оксидативен стрес, Rosa damascena, Хранителна добавка, Лечебно растение

Графично резюме

обещаващ

1. Въведение

Безалкохолната мастна чернодробна болест (NAFLD) се дефинира като натрупване на мазнини в чернодробната тъкан, което надвишава 5% -10% от теглото му при липса на значителна консумация на етанол и се отнася до редица свързани нарушения от проста чернодробна стеатоза до стеатохепатит, напреднала фиброза, както и цироза. 1 Натрупването на мастен черен дроб и чернодробните триглицериди играе ключова роля за прогресирането на различни метаболитни нарушения като захарен диабет, затлъстяване, инсулинова резистентност, хипертония, както и дислипидемия, което показва основния принос на управлението на NAFLD в укрепването на здравето. 2 Последните доказателства подхранват опасенията, че NAFLD може да бъде нов рисков фактор за извънчерен рак. Понастоящем, поради промени в диетичния режим и начина на живот на хората, честотата на NAFLD е повишена, което води до превръщането на това заболяване в едно от най-често срещаните хронични заболявания. 4

Ограниченията на конвенционалните лекарства се считат за полезни при лечението на NAFLD, включително сериозни неблагоприятни ефекти, рецидиви на заболяванията и лекарствени взаимодействия водят до обширна тенденция към нови ресурси за лечение. Естествените лекарства имат дълга история на ефикасна и безопасна употреба в традиционната медицина на различни народи. Последните проучвания на хранителните аспекти на мастната чернодробна патогенеза се фокусират върху оценката на потенциалните ефекти на билковите екстракти и добавки като функционални хранителни съставки за предотвратяване на натрупването на чернодробни липиди. 5

Широк спектър от фитохимични съставки бяха изолирани от бедрата, венчелистчетата и цветята на R. damascena, съдържащи флавоноиди, гликозиди, терпени и антоцианини. Основната активна съставка на R. damascena са фенолни съединения, включително кемпферол, кверцетин, галова киселина, цианидин 3, 5, D-гликозид. 12 β-цитронелол, нонадекан, гераниол, нерол и кемпферол са основните химични съставки на летливото масло от цвете R. damascena. 13 Галактозид, ксилозид, галактозид, рутинозид и арабинозид са сред гликозидния компонент на това растение. 12 В допълнение, карбоксилна киселина, мирцен, азлин, линалоол, гераниол и витамин С са други идентифицирани съединения на R. damascena. 9, 14 Настоящото проучване е проведено за изследване на ефикасността на стандартизиран екстракт от R. damascena в експериментален модел на NAFLD и разкриване на потенциалните механизми.

2. Материал и метод

2.1. Химикали и реактиви

Комплекти реагенти за триглицериди (TG), холестерол (Chol), липопротеин с висока плътност (HDL), липопротеин с ниска плътност (LDL), аланин аминотрансфераза (ALT) и аспартат трансаминаза (AST) са доставени от (Sigma-Aldrich, Steinheim, Германия). Получихме други химикали, освен ако не е посочено друго, от Sigma Chemicals Co. (Сейнт Луис, Мисури, САЩ).

2.2. Растителни материали и екстракция

Цветята на R. damascena бяха събрани през юли 2015 г. от местния билков магазин в Техеран и заверени и образец на ваучер [No: PMP-507] беше депозиран в хербария на Фармацевтичния факултет на Техеранския университет по медицински науки. Цветята бяха изсушени на сянка при стайна температура и смлени на едри частици. За да се приготви хидроалкохолен екстракт, 700 g от растителния прах се екстрахират три пъти със 70% етанол. Всеки екстрахиран разтвор се филтрува и се изпарява до сухо при 40 ° С, за да се получат остатъци около 19,65%. R. damascena хидроалкохолен екстракт (RHE) беше стандартизиран на базата на три полифенола (сиринг киселина, галова киселина и кверцетин), като се използва HPLC метод, както е описано по-горе. 15

2.3. Модели на животни и експериментален дизайн

Мъжки 10-седмични плъхове Wistar-albino с тегло (300–350 g) са настанени при стандартни условия на температура (20–25 ° C), 12 часа цикъл светлина/тъмнина и относителна влажност (55 ± 10%), достатъчно достигане до храна (стандартни гранули) и вода ad libitum. Всички практики с животни са извършени въз основа на Ръководството за грижа и употреба на лабораторни животни от Националния здравен институт, което е одобрено от етичния комитет на Техеранския университет по медицински науки.

42 плъха бяха разделени на случаен принцип в седем групи от по шест на всеки. Една група е получавала рутинна диета както обикновено. Други групи са били хранени с диета с високо съдържание на мазнини (HFD), съдържаща 83% основен фураж, 10% свинска мас, 5% яйчен жълтък на прах и 2% холестерол за период от 8 седмици. След две седмици проучване, групите с HFD се планираха да получат носител (дестилирана вода), симвастатин (като положителен контрол), както и 25, 50, 100 и 200 mg kg -1 ден на RHE. Перорално лечение се прилага на всеки 24 часа в продължение на 6 седмици. Измервахме телесно тегло всяка седмица. Последният ден от изследването, кръвни проби от умъртвени плъхове, събрани от коремната аорта за измерване на TC, LDL, HDL, TG, ALT и AST.

2.4. Оценка на биомаркерите на оксидативния стрес

Кръвните проби се събират в епруветки, съдържащи EDTA, и се центрофугират при 3000 g в продължение на 15 минути за оценка на биомаркерите на оксидативен стрес. За определяне на следните биомаркери, отделената плазма се поддържа при -80 ° C.

2.5. Миелопероксидаза (MPO)

Размразената плазма и 50 тМ фосфатен буфер, съдържащи 0,167 mg/ml о-дианизидин хидрохлорид и 0,0005% H2O2 бяха смесени. След това регистрирахме абсорбцията при 460 nm за 3 минути с помощта на UV-видим спектрофотометър (GBC, Cintra 40). Определението за една единица активност на MPO е промяната в абсорбцията за минута при стайна температура в крайната реакция.

2.6. Липидна пероксидация (LPO)

LPO се оценява, като се използва анализ на реактивни вещества с тиобарбитурова киселина. Трихлороцетна киселина (20%) реагира с кръвни проби и остатъкът се смесва с разтвор на 0,05 М H2SO4. След това във вряща водна баня се добавя 2-тиобарбитурова киселина, последвано от 30 минути инкубация. За извличане на сместа се използва н-бутанол и абсорбцията се записва при 532 nm (ELISA четец, Biotek, Германия). 16.

2.7. Обща молекула тиол (TTM)

За да се определят нивата на плазмения TTM, 5′5 ′ дитиобиснитробензоена киселина (DTNB) реагира с кръвни проби, за да се получи жълт комплекс. Абсорбцията е измерена чрез спектрофотометрия при 412 nm. 17

2.8. Плазмена редуцираща способност на железа (FRAP)

Измерихме FRAP, като използвахме пресен FRAP реагент (25 ml 0,3 М ацетатен буфер, 2,5 ml TPTZ разтвор и 2,5 ml разтвор FeCl3 · 6H2O), смесен с размразени плазмени проби и абсорбцията беше регистрирана при 593 nm. 18.

2.9. Хистопатологичен анализ

За оценка на хистопатологичния анализ, фиксираните сегменти във формалин 10% бяха вградени в парафин и оцветени с хематоксилин и еозин за откриване на чернодробна стеатоза, възпаление и некроза. Слепият патолог извърши хистологичната оценка.

2.10. Статистически анализ

Данните бяха анализирани от SPSS (SPSS Inc., Чикаго, Илинойс, САЩ). Използвахме еднопосочна ANOVA, последвана от post hoc тест на Newman – Keul за множество сравнения. Стойностите на р по-малко от 0,05 се считат за значими. Резултатите се изразяват като средна стойност ± стандартна грешка на средната стойност (SEM).

3. Резултати

3.1. Ефект на RHE върху наддаването на тегло и липидния профил

маса 1

Ефект на екстракт от R. damascena върху телесно тегло на плъхове с мастен черен дроб, индуциран от HFD.

Групи Тегло на тялото (g)
Нормално326,5 ± 16,03
HFD-захранван + V367,33 ± 12,41 а
HFD хранене + симвастатин (20 mg/kg)337,16 ± 16,75 b
Хранене с HFD + RHE 25 mg kg -1 ден -1 350,33 ± 22,50 a
Хранене с HFD + RHE 50 mg kg -1 ден -1 348,33 ± 18,59 a, b
Хранено с HFD + RHE 100 mg kg -1 ден -1 342,83 ± 17,21 б
Хранене с HFD + RHE 200 mg kg -1 ден -1 335,83 ± 13,79 b

Стойностите са средни ± SEM. HFD: диета с високо съдържание на мазнини; RHE: хидроалкохолен екстракт от R. damascena; V: превозно средство.

Стойностите са средни ± SEM. V: превозно средство; HFD: диета с високо съдържание на мазнини; RHE: хидроалкохолен екстракт от R. damascena.

Стойности на MPO (миелопероксидаза) при животни с мастен черен дроб, индуцирани от HFD. Стойностите са средни ± SEM. DS: Дестилирана вода; HFD: диета с високо съдържание на мазнини; RHE: екстракт от Rosa damascena; SV: симвастатин. a Значително различен от нормалната група при pb Значително различен от HFD-захранваната + DS група при pa Значително различен от нормалната група при pb Значително различен от HFD-захранения + DS група при pa Значително различен от нормалната група при pb Значително различно от HFD-хранената + DS група при pa Значително различно от нормалната група при pb Значително различно от HFD-хранената + DS група при p Фиг. 6 A показва чернодробна тъкан на нормален плъх, при който големи, кръгли и доста еуроматични и се появиха ядра без възпалителни клетки. По-високо ниво на стеатоза се наблюдава при животни, хранени с HFD в продължение на 8 седмици (фиг. 6 С). Чернодробната стеатоза се определя чрез оцветяване (хематоксилин-еозин) на чернодробната тъкан. Тежко натрупване на мастни вакуоли в цитоплазмата на хепатоцитите, стеатохепатит и перицентрална некроза, както и разпръсната възпалителна клетъчна инфилтрация е представена при животни, хранени с HFD (фиг. 6 С). Както е представено на фиг. 6 Б, ограничените симптоми на мастна промяна в чернодробните клетки от групата на симвастатин показват, че лекарството предотвратява натрупването на триглицериди в хепатоцитите. Очевидно стеатохепатитът и некрозата бяха потиснати чрез прилагане на RHE лечение (Фиг. 6 D).

4. Дискусия

Безалкохолната мастна чернодробна болест (NAFLD) е често срещана причина за хронично чернодробно заболяване и нейното разпространение се е удвоило приблизително през последното десетилетие с нарастващата епидемия от затлъстяване. 19 NAFLD е силно корелиран с така наречения метаболитен синдром, заедно с диабет, хипертония, атеросклероза, хипертриглицеридемия и затлъстяване. Нездравословните хранителни навици и висококалоричната диета са сред най-важните рискови фактори. От друга страна, няколко проучвания показват, че средиземноморската диета, прилагайки различни билки и приемайки ненаситени мастни киселини, намалява разпространението и/или тежестта на чернодробните заболявания, включително NAFLD. 20 NAFLD се свързва с инсулинова резистентност и хиперинсулинемия, което води до резистентност в антилиполитичния ефект на инсулина в мастната тъкан с увеличаване на свободните мастни киселини. 21, 22

Съществуват ограничени конвенционални лекарства за NAFLD, които имат различни неблагоприятни ефекти; следователно билковите лекарства с понижаващи липидите и антиоксиданти, както и противовъзпалителни дейности могат да играят благоприятна роля за управлението на заболяването. 23.

R. damascena традиционно се използва при различни заболявания, включително стомашно-чревни заболявания. 9 Пресният сок от R. damascena проявява антиоксидантни потенциални ефекти in vitro. 24 Настоящото проучване потвърждава ефикасността на RHE при животински модел на NAFLD. В това проучване NAFLD се индуцира от диета с високо съдържание на мазнини и се оценява резултатът от лечението с RHE при напълняване, както и липиден профил при третираните животни. Всички дози RHE могат да умерят плазмените нива на липидите при плъхове при диета с HFD в сравнение с животни, третирани с носител. Лечението с RHE и симвастатин може да потисне нивата на AST и ALT. Полезните ефекти от лечението на RHE при NAFLD също се оценяват в хистопатологични проучвания.

Важен рисков фактор в патогенезата на NAFLD е оксидативният стрес. Доказано е, че окислението на свободните цитотоксични мастни киселини, причинено от хроничен оксидативен стрес, може да доведе до регулиране на цитокините и изчерпване на нивата на чернодробните антиоксиданти. Днес свободните радикали са известни като един от основните заподозрени за възпаление и увреждане на тъканите при много хронични заболявания, включително чернодробни заболявания. 26, 27 Продукти на липидна пероксидация като малондиалдехид, GGT и окислен LDL, които са повишени при пациенти с NAFLD, могат да бъдат свързани с намалени антиоксиданти. 28 Следователно прилагането на антиоксидантни добавки може да играе важна роля и едно от настоящите фармакологични лечения за NAFLD. Предишно проучване на Memariani et al за определяне на фенолни компоненти от цветя на R. damascena с помощта на HPLC анализ доведе до откриване и количествено определяне на три фенолни съединения, включително галова киселина (118,213 ± 0,12 mg/g изсушен екстракт), кверцетин (12,86 ± 0,31 mg/g изсушен екстракт) и спринцова киселина (3,48 ± 0,19 mg/g изсушен екстракт). 15 Определянето на тези полифеноли с HPLC анализ беше извършено за стандартизация на RHE.

5. Заключение

R. damascena от семейство Rosaceace е традиционно използвано лечебно растение, което демонстрира благоприятни ефекти при няколко стомашно-чревни усложнения. Настоящото проучване демонстрира положителни ефекти на R. damascena като хранителна добавка и алтернативно лекарство при лечението на NAFLD. R. damascena значително намалява повишаването на серумния TG, холестерола, LDL и чернодробните ензими. Подобряването на антиоксидантния статус, както и хепатопротективната активност, медиирана от фенолни съставки, са сред основните потенциални механизми на действие на това природно лекарство. Тъй като това растение е добре познато и безопасно, така че може да бъде кандидат като адювантна терапия заедно с конвенционалните фармакологични лечения за бъдещи проучвания при хора при пациенти, страдащи от NAFLD.

Конфликт на интереси

Авторите декларират, че нямат конфликт на интереси.