Физиология на птиците

Редактиран от
Яджун Уанг

Университет Съчуан, Китай

Прегледан от
Серджо Л. Виейра

Федерален университет в Рио Гранде ду Сул, Бразилия

Васил Пиргозлиев

Университет Харпър Адамс, Великобритания

Принадлежностите на редактора и рецензенти са най-новите, предоставени в техните профили за проучване на Loop и може да не отразяват тяхното положение по време на прегледа.

граници

  • Изтеглете статия
    • Изтеглете PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Допълнителни
      Материал
  • Цитат за износ
    • EndNote
    • Референтен мениджър
    • Прост ТЕКСТ файл
    • BibTex
СПОДЕЛИ НА

Оригинални изследвания СТАТИЯ

  • 1 Катедра по птицевъдство, Университет в Арканзас, Файетвил, AR, САЩ
  • 2 DSM Хранене и здраве на животните, Kaiseraugst, Швейцария

Въведение

Материали и методи

Грижи и употреба на животни

Това проучване е проведено в съответствие с препоръките на Националния здравен институт за употреба и грижи за лабораторни животни. Всички грижи и процедури за животните са одобрени от Институционалния комитет за грижи и употреба на животните към Университета в Арканзас (протокол № 16084).

Процедура за животните и околна среда

маса 1. Състав и хранителен състав на базалната експериментална диета.

Фигура 1. Ефект на добавките myo-Ins и HiPhos по време на експеримент 1 върху приема на храна за пилета, приема на вода и телесното тегло. (А) Състояние на околната среда (RH и T °) на камерите. Myo-Ins и HiPhos не повлияват индивидуалния и кумулативния прием на фураж (B, C). HiPhos намалява индивидуално (Д) и кумулативни (E) прием на вода. Нямаше промяна в BW (F). Данните са представени като средно ± SEM. BW, телесно тегло; Myo-Ins, мио-инозитол.

Събиране на проби

Нарастващите пера и кръв бяха събрани на изходно ниво и след това на всеки 2 часа в продължение на 10 часа (експеримент 1) и 30 часа след хранене (експеримент 2). Растящите пера бяха събрани от левия гръден тракт и живите тъкани (пулпа) бяха разделени, изплакнати в PBS, бързо замразени в течен азот и съхранявани при -80 ° C до употреба. 250 μL кръв бяха събрани за изолиране на РНК и генна експресия, а останалата част беше поставена в хепаринизирана епруветка за плазмено разделяне. Всички проби се съхраняват при -80 ° C до анализ.

Циркулиращо и измерване на мио-инозитол с пера

Изолация на РНК и количествена PCR в реално време

Общата РНК се екстрахира, като се използва реактив Trizol (за перо) или Trizol LS (за кръв) (Life Technologies, Carlsbad, CA) съгласно инструкциите на производителя. Целостта и качеството на РНК се оценява с помощта на 1% електрофореза в агарозен гел и концентрациите и чистотата на РНК се определят за всяка проба чрез Take 3 Micro-Volume Plate с помощта на многорежимния микропланшет Synergy HT (BioTek, Winooski, VT). РНК пробите бяха третирани с DNase, обратна транскрипция с помощта на qScript cDNA Synthesis Supermix (Quanta Biosciences, Gaithersburg, MD) и усилени чрез количествена PCR в реално време (Applied Biosystems 7500 Real Time System) с PowerUp SYBR green master mix (Life Technologies, Carlsbad, CA, САЩ), както е описано по-рано (Rajaei-Sharifabadi et al., 2017). Условията на qPCR циклиране бяха 50 ° С за 2 минути, 95 ° С за 10 минути, последвани от 40 цикъла на двустепенна програма за усилване (95 ° С за 15 s и 58 ° C за 1 минута). В края на амплификацията се прилага анализ на кривата на стопилката, използвайки дисоциационен протокол, за да се изключи замърсяването с неспецифични PCR продукти. Относителната експресия на целевите гени беше определена по метода 2 –ΔΔCt, с нормализиране до 18 s rRNA като домакински ген (Schmittgen and Livak, 2008). Последователностите на олигонуклеотидни праймери, специфични за пиле, са представени в Таблица 2.

Таблица 2. Олигонуклеотидни qPCR праймери в реално време.

Статистически анализ

Данните бяха анализирани чрез двупосочни повтарящи се мерки ANOVA с диета (C, Myo-Ins и HiPhos) и времето като фактори. Ако ANOVA разкри значителни ефекти, средствата се сравняват чрез тест с множество обхвати на Tukey, използвайки Graph Pad Prism версия 6.00 за Windows (Graph Pad Software, La Jolla, CA, САЩ) и разликите се считат за значителни при P # Показва значителна разлика в сравнение с контролната диета при P - Метод ΔΔCt (Schmittgen and Livak, 2008). Данните са представени като средно ± SEM. * Показва значителна разлика в сравнение с базовата линия (C, 0 h) при P - Метод ΔΔCt (Schmittgen and Livak, 2008). Данните са представени като средно ± SEM. * Показва значителна разлика в сравнение с базовата линия (° С, 0 ч) в P Ключови думи: фитатна хидролиза, миоинозитол, фитаза, генна експресия, перо, бройлери

Цитиране: Greene E, Mallmann B, Wilson JW, Cowieson AJ и Dridi S (2020) Мониторинг на хидролиза на фитат с помощта на серийно вземане на проби от кръв и нива на мио-инозитол на перо при бройлери. Отпред. Физиол. 11: 736. doi: 10.3389/fphys.2020.00736

Получено: 08 април 2020 г .; Приет: 08 юни 2020 г .;
Публикувано: 26 юни 2020 г.

Yajun Wang, Университет Съчуан, Китай

Серджо Луис Виейра, Федерален университет в Рио Гранде ду Сул, Бразилия
Васил Пиргозлиев, Университет Харпър Адамс, Великобритания