През последните години става все по-популярно храненето на кучета със сурова диета на основата на месо (RMBD), вместо с по-конвенционалните сухи хапки или консерви за домашни любимци. Диети на основата на сурово месо, наричани още кости и сурова храна или биологично подходяща сурова храна (BARF) или сурови животински продукти (RAP), не се подлагат на никаква форма на топлинна обработка преди охлаждане или замразяване и могат да бъдат домашно приготвени или произведени в търговската мрежа. Храни, произведени специално за кучета, са на разположение през последните 150 години. В миналото диетата на кучетата обикновено се състоеше от остатъци от домакинството, остатъци от храна/отломки, боклук, който кучетата се нахранваха на улицата или малки животни, които убиваха. Първата бисквита за кучета е произведена през 60-те години на XIX век, а първата фуражна храна за кучета през 1922 г. Едва в края на 50-те години на пазара се предлага суха храна за кучета.

наличие

Съществуват различни мнения относно предимствата и недостатъците на RMBD. Привържениците на храненето с RMBD твърдят, че суровите диети, съдържащи пресни, естествени съставки, недвусмислено са най-добрият хранителен избор. В проучване собствениците, хранещи RMBD на своите домашни любимци, съобщават за важни ползи за здравето, като подобрения в имунната система, кожата и козината, намаляване на зъбните заболявания и по-ниска честота на хранителни алергии.2 3 Противниците на RMBD смятат, че това представлява риск на инфекция при домашни животни, а също и риск от предаване на зоонозни и устойчиви бактерии на хората. Много предишни проучвания са открили зоонозни бактерии в RMBD, понякога на високи нива.4–7 Финландско проучване съобщава за наличието на чревни патогени в RMBD и идентифицира риск от нарушаване на баланса на диетата и кости, пробиващи стомашно-чревния тракт.4

Стомашно-чревната микробиота е изключително сложна екосистема при кучета и котки, а също и при хора. Стомашно-чревната микробиота е значително повлияна от типа на диетата и се изчислява да се състои от 10 10 –10 14 бактерии на грам.8 Установено е, че кучетата, хранени с естествена диета, състояща се от кости, сурово месо и зеленчуци, приемат значително по-променлива и обилна стомашно-чревна флора, отколкото кучета, хранени с търговска диета.8 В предишно шведско проучване на RMBD, Escherichia coli е изолирана от всички проби на RMBD и антимикробната резистентност към цефалоспорини с разширен спектър (устойчиви на ESC E coli) е открита при 23% от Това означава, че тесният контакт между кучета и хора предоставя възможност за предаване на антимикробно-устойчиви бактерии, принадлежащи към Enterobacteriaceae, представляващи риск за човешкото здраве.11 12 Бета-лактамази с произведен разширен спектър (ESBL), които са резистентни на множество антибиотици, вероятно ще бъдат голямо бъдещо предизвикателство както в хуманната, така и във ветеринарната медицина.

Campylobacter може лесно да колонизира червата на кучетата и често се изолира от изпражненията на здрави кучета.13 14 Видът Campylobacter, който най-често се изолира от фекалиите на кучета, е C upsaliensis, последван от C jejuni.14–17 Campylobacter видовете са често срещани в нормалното черво микробиота както на животни, отглеждащи здравословни храни (напр. птици, свине, говеда и овце), така и на диви животни.18–21 Тези резервоари непрекъснато замърсяват околната среда и хранителните продукти и са източник на патогени за кампилобактериоза при хората.

Видове салмонела са открити в RMBD в няколко проучвания, с честота, варираща между 2% и 20% от изследваните проби.4 6 7 22 23 Има различни пътища за предаване на салмонела до RMBD, например, месото може да бъде замърсено със салмонела с произход от чревния тракт на различните животински видове, от които произлизат карантиите.24 Салмонелата може да произхожда и от подправките, билките или зеленчуците, използвани във формулата RMBD.25 Тъй като RMBD не се подлага на никаква форма на топлинна обработка преди охлаждане или замръзване, има възможности кучетата, хранени с RMBD, да бъдат колонизирани със салмонела и да ги изхвърлят в местната среда. Съобщава се за предаване на салмонела на хора в едно и също домакинство, което показва, че домашните любимци са потенциален източник на инфекция.26 27

Целта на това проучване беше да се изследват разликите в появата на ESBL E coli, Campylobacter видове и Salmonella видове в проби от изпражнения от кучета, хранени с RMBD и проби от изпражнения от кучета, получаващи строга диета със суха храна, т.е.

Материали и методи

Вземане на проби

Собствениците на кучета бяха наети да участват в проучването и да представят проби от изпражнения от кучетата си за микробиологичен анализ, чрез „реклама“ във Facebook групите „Veterinärstudenter“ (Ветеринарни студенти) и „Vi som bor på Gälbo och Kronåsen“ (Жители в Gälbo и Kronåsen) и чрез лични молби към студенти и служители от Шведския университет по земеделски науки (SLU). Всички кучета, включени в проучването, са живели в община Упсала, главно в Campus Ultuna около SLU. Всички анализи бяха започнати в рамките на 24 часа след вземането на проби. Пробите от фекалии бяха взети от земята веднага след дефекацията и съхранявани в чисти торбички или консервни кутии до анализ. Цялото вземане на проби се извършва през септември и октомври, в повечето случаи сутрин, а анализите започват следобед на същия ден.

Кучетата трябва да отговарят на следните критерии, за да бъдат включени в проучването: на възраст поне шест месеца, клинично здрави (без симптоми на заболяване) и не лекувани с антибиотици през предходните две седмици. Набрани са общо 50 кучета, които са разделени на две равни групи: тези, които са хранени само със суха фуражка през предходните две седмици (група сухи фуражи) и тези, хранени с някакъв вид RMBD поне веднъж седмично или за предпочитане повече, в седмицата преди това вземане на проби (RMBD група).

Общо бяха анализирани 50 проби от фекалии от 50 различни кучета за наличие на ESBL E coli, Campylobacter и Salmonella. Възрастта на участващите кучета варира от 6 месеца до 14 години. Представени бяха редица различни породи, като кокер шпаньол, мопс, пудел, ретривър за патица от Нова Скотия, лабрадор ретривър, плосък ретривър, акита, норич териер, сибирско хъски, веймаранер, евразиер, финландски лафунд, коли, австралийска овчарка брой смесени породи. Много кучета от групата на RMBD са яли и други фуражи в допълнение към RMBD, като сухо хапване. От 25 кучета в групата с RMBD, 11 също са били хранени с малко суха дроб. RMBD и сухият гранулат произхождат от няколко различни производители.

ESBL E coli

Наличието на ESBL E coli се анализира както чрез директна култура, така и чрез култура чрез обогатяване. Фекалиите се култивират директно върху CHROMagar Orientation (Chromagar, Париж, Франция), съдържащи 1 mg цефотаксим (цефалоспорин) на литър и се инкубират при 37 ° С за 24 + 24 часа. За обогатяване 10 g фекалии се смесват с 90 ml буферирана пептонова вода (BPW), разреждане 1/10, инкубират се при 37 ° C в продължение на 18–24 часа и след това се култивират върху CHROMagar Orientation и се инкубират при 37 ° C за 18 -24 часа. Предполагаемите колонии на E coli върху ориентация на CHROMagar бяха рекултивирани върху кръвен агар и инкубирани при 37 ° C ± 1 ° C в продължение на 24 ± 3 часа и тяхната идентичност беше потвърдена чрез матрична матрична спектрометрия за десорбция/йонизация по време на полет (MALDI -TOF MS).

Изпитването за чувствителност е извършено на 13 от Е коли, изолирани върху CHROMagar Orientation, тъй като един от изолатите не може да бъде възстановен. Чувствителността към избрани антимикробни вещества се оценява с VetMIC GN-mo (SVA, Упсала, Швеция), като се определят минималните антимикробни инхибиторни концентрации (MIC). Референтният щам E coli CCUG 17620 е използван като контрол на качеството. Стойностите на епидемиологичната граница (ECOFF) за определяне на чувствителността са получени от Европейския комитет за изпитване на чувствителност към антимикробни лекарства (EUCAST) (www.eucast.org, получено на 12 юли 2019 г .; таблица 1). ESBL е група ензими, които са устойчиви на пеницилини и много цефалоспорини и се дължат на трансмисивни плазмиди, често срещани сред E coli и други ентеробактерии, докато ESBLCARBA е терминът за механизъм на резистентност към повечето пеницилини, цефалоспорини и карбапенем. Мултирезистентността се определя като резистентност срещу бета-лактами и поне два други антибиотични класа.28 Например, резистентността към ципрофлоксацин и налидиксинова киселина се счита за резистентност към един антибиотичен клас (хинолони).

Антибиограма на 13 щама Escherichia coli, изолирани от фекалии, култивирани върху CHROMagar ориентация с цефотаксим

Видове Campylobacter

Появата на Campylobacter е анализирана съгласно ISO 10272, част 1 (2017), с някои модификации. Накратко, фекалиите се култивират директно върху модифициран въглен-цефоперазонов дезоксихолатен агар (mCCDA) (Oxoid, Basingstoke, UK) и плочите се инкубират при 37,0 ° C ± 1 ° C в продължение на пет дни в микроаерофилна атмосфера, генерирана от използването на CampyGen (Oxoid, Basingstoke). Идентифицирането на видовете Campylobacter се основава на типични морфологични аспекти, бели до сиви колонии с метален блясък, съгласно ISO 10272, част 1 (2017). Предполагаемите колонии Campylobacter се култивират върху кръвен агар и се инкубират при 37,0 ° C ± 1 ° C в продължение на 44 ± 4 часа и тяхната идентичност е потвърдена от MALDI-TOF MS.

Видове салмонела

Идентификация на видовете

Бактериите, считани за интересни и подходящи за изследването, бяха допълнително анализирани от MALDI-TOF MS, използвайки Microflex LT MALDI-TOF MS (Bruker Daltonics, Billerica, Massachusetts, USA). Накратко, единични колонии бяха взети от чинии с пресен агар и намазани/забелязани върху таргетната плака на MALDI-TOF MS, последвано от добавяне на 1 ul разтвор на матрица на а-циано-4-хидроксикинамиена киселина (Bruker Daltonics). След изсушаване, масспектралният пръстов отпечатък се генерира с MALDI-TOF MS инструмент и получените спектри се сравняват с референтен спектър от база данни. След това се извърши идентификация на родовете и видовете, като се използва системата Bruker Maldi Biotyper.

Статистически анализ

Брой проби от фекалии от 25 кучета, хранени със сурова диета на основата на месо (RMBD), и 25 кучета, хранени само със сух дроб, в който са открити бета-лактамази с разширен спектър на действие Escherichia coli, видове Campylobacter и/или Salmonella.

E coli с ESC резистентност е изолирана от 14 от 50 анализирани проби от фекалии. За групата с RMBD ESBL E coli е открита в 13 (52%) от 25-те проби на фекалиите. За групата сухи фуражи ESBL E coli е открит само в 1 (4%) от 25-те проби от фекалии (фигура 1). Тази разлика е статистически значима (P = 0,0003). Всички 13 тествани щамове на Е coli са били резистентни към ампицилин, цефотаксим и цефтазидим и 3 (изолати 2, 9 и 11) от тях са били устойчиви на три или повече антибиотични класа, т.е. Устойчива на карбапенем Е coli не е изолирана от нито една от пробите.

Видовете Campylobacter са открити в 16 от 50 анализирани проби от фекалии. За групата кучета, хранени с RMBD, видове Campylobacter са изолирани от 12 (48%) от 25-те проби от фекалии. За групата кучета, хранени със сух дроб, видовете Campylobacter са открити в 4 (16%) от 25-те проби фекалии (фигура 1). Тази разлика е статистически значима (P = 0,03). Един от изолатите е идентифициран като C jejuni, който е открит във фекална проба от куче от групата с RMBD. Останалите видове Campylobacter са идентифицирани като C upsaliensis или C helveticus. И двете може да са присъствали в пробите с положителни фекалии, или MS на MALDI-TOF може да не е успяла да ги различи, тъй като са толкова тясно свързани.

Видовете салмонела са открити само в една проба от фекалии, от куче от групата с RMBD (фигура 1). Изолираният вид Salmonella е идентифициран като S enterica подвид enterica, серовар Typhimurium. Видовете Campylobacter и ESBL E coli не са открити във фекалната проба, че са открити видове Salmonella.

Дискусия

ESBL E coli е изолиран по-често в проби от фекалии от кучета, хранени с RMBD, отколкото в проби от кучета, хранени със сух дроб. Този резултат се очакваше, тъй като предишно шведско проучване изолира E coli от всички тествани (n = 39) проби от фураж с RMBD и установи, че девет (23%) от пробите с RMBD съдържат устойчиви на ESC E coli.10 ESC-устойчиви бактерии принадлежащи към семейство Enterobacteriaceae също са изолирани от добитък и в RMBD в проучвания, проведени в други страни.7 29–33 Може да се твърди, че RMBD трябва да бъде напълно изоставен поради тази причина, отчасти за да се избегне рискът за самите кучета, но също така тъй като съществува риск от разпространение на резистентни бактериални гени сред други в домакинството и в общността. Потвърдено е, че ESBL E coli може да се разпространява между животни и хора в едно и също домакинство

В това проучване има значителна разлика в честотата на видовете Campylobacter във фекалиите при кучета, хранени с RMBD, и кучета, хранени със сух дроб. Подобни резултати са намерени в проучване в Нова Зеландия, където кучетата, консумиращи RMBD, са били 12,3 пъти по-склонни (P = 0,03) да бъдат носители на C upsaliensis, отколкото кучета, консумиращи сух фураж.5 домашните птици са основната съставка, RMBD е по-вероятно (P = 0,006) да бъде замърсено с видове Campylobacter, отколкото когато основната съставка е някакъв друг вид месо.5 За съжаление авторите не могат да проверят за разлики в разпространението на видовете Campylobacter в фекалии на кучета, хранени с RMBD въз основа на домашни птици в сравнение с говеда или свинско месо, тъй като авторите нямат достъп до такива данни. Откриването на видове Campylobacter в 48% от пробите на фекалиите не е изненадващо, тъй като няколко други проучвания са изолирали Campylobacter видове от фекалиите на клинично здрави кучета, със степен на откриване от 37% до 76% .5 13 14 16 Кампилобактериозата е най-често съобщаваното зоонозно заболяване в Европа.24 Въпреки че C upsaliensis не е най-честата причина за кампилобактериоза при хората, описани са няколко случая.35