Конфокални изображения, показващи характерната морфология на структурите, оцветени с нуклеокапсиден протеин (NP) на вируса на Tula (TULV) в ранни, пикови и персистиращи етапи на TULV инфекция в клетки Vero E6 (A) Vero E6 клетките бяха заразени с TULV при множественост на инфекцията от 0,1 и изображенията бяха направени на 36 h след заразяване (hpi), 7 дни след заразяване (dpi) и 30 dpi, използвайки 40-кратно увеличение. Ядрата бяха оцветени с DAPI (синьо) и TULV NP, открити с помощта на NP антисеруми (зелено), разкриващи характерните NP точковидни и нишковидни/тръбни структури в перинуклеарната област. (B) Последователните Z секции на TULV-инфектирани клетки при 30 dpi показват NP нишковидни/тръбни структури, простиращи се около ядрото. Скалите представляват 30 μm.

Изображения с трансмисионна електронна микроскопия (TEM), показващи нишковидни структури в заразените с TULV клетки Vero E6. Vero E6 клетки, (A) инфектирани или заразени с TULV при MOI от 0,1 при (B) 7 дни след инфекцията (dpi) или (C) 30 dpi. Изображенията с по-голямо увеличение от маркираните вградени области са показани в дясната колона. Скалите представляват съответно 500 nm и 1 μm на микрофотографии с ниско и голямо увеличение.

Колокализация между TULV NP и цитоскелетни филаменти в ранните, пиковите и персистиращите етапи на TULV инфекция в Vero E6 клетки. Пространственото разпределение на цитоскелетните маркери актин, тубулин и виментин (пурпурен) се наблюдава заедно с TULV NP (зелено) в клетки Vero E6, заразени с TULV при MOI от 0,1 чрез конфокална микроскопия при 40-кратно увеличение при (A) 36 h след инфекцията (hpi), (B) 7 дни след инфекцията (dpi) и (C) 30 dpi. Скалата представлява 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуер на Фиджи с обозначените етикети с номера, съответстващи на съседни графики за сканиране на линии. Ядрата бяха оцветени с DAPI (синьо), TULV NP беше открит с помощта на NP антисеруми и цитоскелетът беше открит, използвайки първични антитела срещу β-актин, β-тубулин и виментин. Изображенията, показани в панели A, B и C, показват представителния анализ на 87, 109 и 58 клетки съответно.

Колокализация между TULV NP и гранулите на стреса (SGs) или обработващите тела (PB) в ранните, пиковите и персистиращите етапи на TULV инфекция в клетките Vero E6. Пространственото разпределение на SG маркера TIA-1 и PB маркера DCP1a (пурпурен) се наблюдава заедно с TULV NP (зелено) в клетки Vero E6, заразени с TULV при MOI от 0,1 чрез конфокална микроскопия при увеличение 40 × в следващите моменти от време; (A) 36 h след инфекция (hpi), (B) 7 дни след инфекция (dpi) и (C) 30 dpi. Скалите представляват 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуера на Фиджи с обозначените обозначения с номера, съответстващи на съседните графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива, като се използват NP антисеруми, а SG и PB се откриват, като се използват специфични антисеруми срещу TIA-1 и DCP1a, съответно. Процентното ко-локализиране на D) TIA-1 и E) DCP1a puncta, ко-локализиращо се с NP във всичките три времеви точки, се определя количествено и се представя като отделни хистограми. Изображенията, показани на панели A, B и C, показват представителен анализ на 7, 25 и 23 клетки, съответно.

Колокализация между TULV NP и ендоплазмения ретикулум (ER) или отделенията на Golgi в ​​ранните, пиковите и персистиращите етапи на TULV инфекция във Vero E6 клетки. Пространственото разпределение на ендоплазмения ретикулум и мрежата на Голджи (и двете магента) се наблюдава заедно с TULV NP (зелено) в клетките Vero E6, заразени с TULV при MOI от 0,1 чрез конфокална микроскопия при увеличение 40 X при (A) 36 h след инфекцията (hpi), (B) 7 дни след инфекцията (dpi) и (C) 30 dpi. Скалите представляват 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуера на Фиджи с обозначените обозначения с номера, съответстващи на съседните графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми, като ER се открива с помощта на конканавалин-А и Golgi се открива от специфични антисеруми. Изображенията, показани в панели A, B и C, показват представителен анализ на 19, 27 и 13 клетки, съответно.

Колокализация между TULV NP и TULV малки (S) сегментни РНК в ранните, пикови и персистиращи етапи на TULV инфекция във Vero E6 клетки. Пространственото разпределение на TULV NP (зелено) с положителен и отрицателен смисъл на R сегмента на S сегмента (червено), открито със специфични нишки сонда, беше наблюдавано с помощта на конфокална микроскопия при (A) 36 h след инфекция (hpi), (B) 7 дни след инфекция (dpi) и (C) 30 dpi. Лентите с размери представляват 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуера на Фиджи с обозначените обозначения с номера, съответстващи на съседните графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми и S сегментната РНК се открива с помощта на сензорни или антисензорни РНК FISH сонди. Изображенията, представени в панели A, B и C, показват представителен анализ на 14, 25 и 8 клетки съответно.

Колокализация между TULV NP, положителните TULV S сегменти и отрицателните РНК и компонентите на гостоприемни клетки TIA-1 и маркера на Golgi в ​​клетките Vero E6 на 30 дни след инфекцията. Пространственото разпределение на TULV NP (зелено), S сегментната РНК (пурпурна) и маркерите на гостоприемни клетки (A) TIA-1 или (B) Golgi (и двете червени) са наблюдавани по време на персистиращите инфекции с помощта на конфокална микроскопия при 40 × увеличение. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуер на Фиджи с обозначени номера на етикети, съответстващи на съседните графични линии за сканиране. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми, с TIA-1 и Golgi се откриват с помощта на специфични антисеруми. Скалата представлява 30 μm. TULV NP беше открит с помощта на NP антисеруми, а РНК на S сегмента бяха открити, използвайки отделни набори от положителни или отрицателни RNA FISH сонди. Изображенията, показани в панели A и B, показват представителен анализ на 8 и 20 клетки, съответно.

Резюме

текст

Конфокални изображения, показващи характерната морфология на структурите, оцветени с нуклеокапсиден протеин (NP) на вируса на Tula (TULV) в ранни, пикови и персистиращи етапи на TULV инфекция в клетки Vero E6 (A) Vero E6 клетките бяха заразени с TULV при множественост на инфекцията от 0,1 и изображенията бяха направени на 36 h след заразяване (hpi), 7 дни след заразяване (dpi) и 30 dpi, използвайки 40-кратно увеличение. Ядрата бяха оцветени с DAPI (синьо) и TULV NP, открити с помощта на NP антисеруми (зелено), разкриващи характерните NP точковидни и нишковидни/тръбни структури в перинуклеарната област. (B) Последователните Z секции на TULV-инфектирани клетки при 30 dpi показват NP нишковидни/тръбни структури, простиращи се около ядрото. Скалите представляват 30 μm.

Изображения с трансмисионна електронна микроскопия (TEM), показващи нишковидни структури в заразените с TULV клетки Vero E6. Vero E6 клетки, (A) инфектирани или заразени с TULV при MOI от 0,1 при (B) 7 дни след инфекцията (dpi) или (C) 30 dpi. Изображенията с по-голямо увеличение от маркираните вградени области са показани в дясната колона. Скалите представляват съответно 500 nm и 1 μm на микрофотографии с ниско и голямо увеличение.

Колокализация между TULV NP и цитоскелетни филаменти в ранните, пиковите и персистиращите етапи на TULV инфекция в Vero E6 клетки. Пространственото разпределение на цитоскелетните маркери актин, тубулин и виментин (пурпурен) се наблюдава заедно с TULV NP (зелено) в клетки Vero E6, заразени с TULV при MOI от 0,1 чрез конфокална микроскопия при 40-кратно увеличение при (A) 36 h след инфекцията (hpi), (B) 7 дни след инфекцията (dpi) и (C) 30 dpi. Скалата представлява 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуер на Фиджи с обозначените етикети с номера, съответстващи на съседни графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми и цитоскелетът се открива с помощта на първични антитела срещу β-актин, β-тубулин и виментин. Изображенията, показани в панели A, B и C, показват представителния анализ на 87, 109 и 58 клетки съответно.

Колокализация между TULV NP и гранулите на стреса (SGs) или обработващите тела (PB) в ранните, пиковите и персистиращите етапи на TULV инфекция в клетките Vero E6. Пространственото разпределение на SG маркера TIA-1 и PB маркера DCP1a (пурпурен) се наблюдава заедно с TULV NP (зелено) в клетките Vero E6, заразени с TULV при MOI от 0,1 чрез конфокална микроскопия при увеличение 40 × в следващите моменти от време; (A) 36 h след инфекция (hpi), (B) 7 дни след инфекция (dpi) и (C) 30 dpi. Скалите представляват 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуера на Фиджи с обозначените обозначения с номера, съответстващи на съседните графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива, като се използват NP антисеруми, а SG и PB се откриват, като се използват специфични антисеруми срещу TIA-1 и DCP1a, съответно. Процентното ко-локализиране на D) TIA-1 и E) DCP1a puncta, ко-локализиращо се с NP във всичките три времеви точки, се определя количествено и се представя като отделни хистограми. Изображенията, показани на панели A, B и C, показват представителен анализ на 7, 25 и 23 клетки, съответно.

Колокализация между TULV NP и ендоплазмения ретикулум (ER) или отделенията на Golgi в ​​ранните, пиковите и персистиращите етапи на TULV инфекция във Vero E6 клетки. Пространственото разпределение на ендоплазмения ретикулум и мрежата на Голджи (и двете магента) се наблюдава заедно с TULV NP (зелено) в клетките Vero E6, заразени с TULV при MOI от 0,1 чрез конфокална микроскопия при увеличение 40 X при (A) 36 h след инфекцията (hpi), (B) 7 дни след инфекцията (dpi) и (C) 30 dpi. Скалите представляват 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуера на Фиджи с обозначените обозначения с номера, съответстващи на съседните графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми, като ER се открива с помощта на конканавалин-А и Golgi се открива от специфични антисеруми. Изображенията, показани в панели A, B и C, показват представителен анализ на 19, 27 и 13 клетки, съответно.

Колокализация между TULV NP и TULV малки (S) сегментни РНК в ранните, пикови и персистиращи етапи на TULV инфекция във Vero E6 клетки. Пространственото разпределение на TULV NP (зелено) с положителен и отрицателен смисъл на R сегмента на S сегмента (червено), открито със специфични нишки сонда, беше наблюдавано с помощта на конфокална микроскопия при (A) 36 h след инфекция (hpi), (B) 7 дни след инфекция (dpi) и (C) 30 dpi. Лентите с размери представляват 30 μm. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуера на Фиджи с обозначените обозначения с номера, съответстващи на съседните графики за сканиране на линии. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми и S сегментната РНК се открива с помощта на сензорни или антисензорни РНК FISH сонди. Изображенията, представени в панели A, B и C, показват представителен анализ на 14, 25 и 8 клетки съответно.

Колокализация между TULV NP, положителните TULV S сегменти и отрицателните РНК и компонентите на гостоприемни клетки TIA-1 и маркера на Golgi в ​​клетките Vero E6 на 30 дни след инфекцията. Пространственото разпределение на TULV NP (зелено), S сегментната РНК (пурпурна) и маркерите на гостоприемни клетки (A) TIA-1 или (B) Golgi (и двете червени) са наблюдавани по време на персистиращите инфекции с помощта на конфокална микроскопия при 40 × увеличение. Сканирането на флуоресцентни линии беше направено с помощта на софтуер на Фиджи с обозначени номера на етикети, съответстващи на съседните графични линии за сканиране. Ядрата се оцветяват с DAPI (синьо), TULV NP се открива с помощта на NP антисеруми, с TIA-1 и Golgi се откриват с помощта на специфични антисеруми. Скалата представлява 30 μm. TULV NP беше открит с помощта на NP антисеруми, а РНК на S сегмента бяха открити, използвайки отделни набори от положителни или отрицателни RNA FISH сонди. Изображенията, показани в панели A и B, показват представителен анализ на 8 и 20 клетки, съответно.