Сулфит-медииран оксидативен стрес в бъбречните клетки.

оксидативен

Заден план

Хроничната бъбречна недостатъчност е свързана с оксидативен стрес. Серумният сулфит, сулфат, цистеин, хомоцистеин, цистеин сулфинова киселина и γ-глутамилцистеин са повишени при пациенти на хемодиализа, което предполага ускорен катаболизъм на съдържащи сяра аминокиселини или намалено елиминиране на сулфит/сулфат или и двете. Установено е също, че приложението на метабисулфит уврежда бъбречните клетки.

Методи

Измерването на активните кислородни форми (ROS) се извършва с флуоресценцията на дихлорфлуоресцеин (DCF), а тази на вътреклетъчния АТФ е чрез реакцията луциферин-луцифераза. Окислението на сулфит и сукцинат чрез изолирани митохондрии от бъбречен плъх се наблюдава полярографски. Флуоресцентната сонда, 5, 5 ', 6, 6'-тетрахлоро-1,1', 3,3'-тетраетилбензимидазолкарбоцианин йодид (JC-1) беше използвана за оценка на всяка загуба на мембранния потенциал в енергизиращи респириращи митохондрии. Дейностите на глутамат и малат дехидрогенази (GDH, MDH, съответно) бяха изследвани чрез спектрофотометричното измерване на NADH. Сулфитът се определя чрез HPLC-флуориметрично измерване на монохлорбиман-сулфит, а жизнеспособността на клетките се извършва чрез MTT процедура.

Резултати

Непосредствено увеличение на ROS, последвано от излагане на кучешки бъбреци на Madin-Darby (MDCK), тип II и бъбреци от опосум (OK) на 5–500 μmol/L сулфит. Наблюдава се и изчерпване на вътреклетъчния АТФ. Ниска скорост на окисляване на 100 μmol/L сулфит се наблюдава полярографски в изолирани бъбречни митохондрии, но стимулираното от ADP дишане на състояние 3 не е очевидно. АТФ биосинтезата от окисляването на глутамат в митохондриите на бъбреците на плъхове беше значително инхибирана чрез съвкупност със 100 μmol/L сулфит; това не беше случаят с малат, сукцинат и TMPD/аскорбат. Въпреки това, активността както на GDH, така и на MDH в екстракта от митохондрии на бъбреците беше инхибирана. Потенциалът на митохондриалната мембрана и жизнеспособността на клетките не са нарушени.

Заключение

Микромоларният сулфит предизвика незабавно увеличаване на ROS в MDCK, тип II и OK клетки. Това беше придружено от изчерпване на вътреклетъчния АТФ, което може да се обясни с неговия инхибиторен ефект върху митохондриалната GDH. Въпреки че MDH е инхибиран по подобен начин, въздействието е буферирано от високото ниво на този ензим в митохондриите на бъбреците.

Предишен статия в бр Следващия статия в бр