Ханс Кристиан Уинклер

Институт по фармакология и токсикология, Университет на Цюрих-Вецуис, Winterthurerstrasse 260, 8057 Цюрих, Швейцария

безопасността

Марк Сутър

Отдел по имунология, Факултет Vetsuisse, Университет в Цюрих, Winterthurerstrasse 260, 8057 Цюрих, Швейцария

Ханспетер Негели

Институт по фармакология и токсикология, Университет на Цюрих-Вецуис, Winterthurerstrasse 260, 8057 Цюрих, Швейцария

Резюме

Заден план

Препоръка на Европейската комисия определя наноматериалите с едно измерение, което не надвишава 100 nm [6]. Няма обаче солидна научна основа, която да предложи строга граница на размера и префиксът „nano“ не прави веществото автоматично вредно. Въпреки това, наноразмерната скала променя характеристиките на материала в сравнение с по-големите частици или същото вещество в разтворено състояние. Наноразмерните материали показват повишено съотношение на повърхността към масата, което подобрява тяхната реактивност в сравнение с по-големите структури [7, 8]. Също така, наноразмерните частици лесно проникват през непокътнати клетъчни мембрани, като по този начин предоставят потенциал за трафик през биологични бариери, включително епитела на стомашно-чревния тракт [9–13]. Досега здравните ефекти на наночастиците са изследвани главно във връзка с дихателното поемане [14]. Като се имат предвид широко разпространените употреби, свързани с храните, обаче, има спешна необходимост от преглед на пригодността на оралната токсичност и проучвания за оценка на риска, насочени към дългосрочната безопасност на наноструктуриран силициев диоксид.

Синтетичен аморфен силициев диоксид

Силицият (Si) е металоид, показващ атомно тегло 28. Термините „силиций“ и „силициев диоксид“ се отнасят до естествени или антропогенни материали, съставени от силициев диоксид (SiO2), който се появява в две основни форми, т.е. кристален и аморфен . Синтетичният аморфен силициев диоксид (SAS) се прилага широко за преработени храни и е регистриран от ЕС като хранителна добавка с код E 551 [15]. Основната цел на SAS частиците в хранително-вкусовата промишленост е да се предотврати лош поток или „слепване“, особено в прахообразни продукти. SAS частиците се използват допълнително като сгъстител в пасти или като носител на аромати, а също така за избистряне на напитките и контрол на разпенването [16–18].

В природата частиците силициев диоксид съществуват в големи количества и се признава, че те са били хранителни съставки през човешката еволюция. Обаче оценката на риска от силициев диоксид, обсъдена в този преглед, е ограничена до изкуствени материали, въведени като хранителни добавки. През 1942 г. Хари Клоепфер (химик, работещ в Degussa, сега Evonik) изобретява процедурата Aerosil за производството на SAS частици, предназначени за хранителната промишленост [19, 20]. След стандартен пирогенен процес, известен също като пламъчна хидролиза, силициевият тетрахлорид се изгаря във водороден пламък при температури 1000–2500 ° C, образувайки силициеви наночастици с диаметър

10 nm [21]. Този материал е обозначен като пирогенен или димящ силициев диоксид, позовавайки се на горния производствен метод. При алтернативен мокър път на синтез, наноструктурирани SAS частици, обозначени като утаен силициев диоксид, силикагел или хидратен силициев диоксид, се получават от силикати на алкални метали, разтворени във вода и реагиращи със сярна киселина. В ЕС като хранителна добавка се допускат само синтетични частици, получени чрез тези пирогенни или влажни процеси [15]. Всички продукти на SAS се агрегират в по-големи частици с размери от порядъка на 100 nm, които допълнително се агломерират, за да образуват структури с размер на микрона [14, 22]. Терминът "агрегат" описва съвкупност от частици, държани заедно от силни сили като ковалентни или метални връзки. "Агломератите" на частиците се появяват в резултат на слаби сили като взаимодействия на Ван дер Ваалс, водородно свързване, електростатични привличания или адхезия от повърхностно напрежение. SAS материалите са хидрофилни, но могат да се превърнат в хидрофобни, като по този начин намаляват поемането на влага чрез последващи модификации на повърхността.

Проучвания за орална токсичност с използване на SAS частици

Синопсис на проучвания върху животни, посветени на безопасността на устната кухина на частици SAS, е публикуван от Европейския център за екотоксикология и токсикология на химикалите (ECETOC) [23] и отскоро от Организацията за икономическо сътрудничество и развитие (OECD) [24 ]. Няма смъртност или неблагоприятни признаци в резултат на остра експозиция от еднократно перорално приложение на хидрофилни SAS частици на гризачи в дози до 5000 mg на kg телесно тегло. Проведено е субакутно (28-дневно) проучване чрез орално администриране на хидрофилни SAS частици на плъхове Wistar. Дневните дози варират между 100 и 1000 mg/kg телесно тегло. Нито една от наблюдаваните крайни точки (клинични признаци, консумация на храна, телесно тегло, поведенчески тестове, хематология, параметри на клиничната химия, тегло на органи, макроскопска патология и хистологични изследвания) не разкрива никакви аномалии, свързани с веществото [25].

маса 1

Перорални проучвания за токсичност при многократна доза с аморфен силициев диоксид, даващи чернодробни ефекти

Видове Проучвателна дължина ЕфектLOAELNOAELРеференция
Плъхове Wistar5-8 седмициЧернодробна атрофия1000 mg/kg телесно тегло на ден500 mg/kg телесно тегло на ден[29, 30]
Balb/c мишки10 седмициМастен черен дроб1500 mg/kg телесно тегло на денNA[31]
Sprague – Dawley плъхове12 седмициПерипортална чернодробна фиброза810 mg/kg телесно тегло на денNA[32]
Плъхове Фишер103 седмициНамалено чернодробно тегло1000 mg/kg телесно тегло на ден500 mg/kg телесно тегло на ден[33]

Доставката на частици става чрез включване във фуража. Тази таблица предлага стойности на LOAEL (най-ниското наблюдавано ниво на неблагоприятни ефекти) и NOAEL (без наблюдавано ниво на неблагоприятни ефекти), които се различават от тези, предвидени в предишни доклади за оценка на риска. Други проучвания с многократни перорални дози [25–27] не предизвикват неблагоприятни ефекти

Таблица 2

Очертание на изследването за хронична токсичност с SAS частици, проведено при плъхове

Седмици на хранене0515305081103
Телесно тегло (g)108 ± 6174 ± 9223 ± 11253 ± 10310 ± 18364 ± 26359 ± 56
Прием на фураж (g/ден) 11,1 ± 0,410,4 ± 0,410,2 ± 0,511,9 ± 0,813,2 ± 0,812,7 ± 2,7
Прием на SAS (g/kg телесно тегло на ден) 3.22.32.01.91.81.8

Обобщени данни от проучването за орална хронична токсичност при плъхове Fischer [33]. Тази таблица илюстрира връзката между телесното тегло, приема на фураж и дневните дози при жените от групата с най-висока доза, където фуражът е бил допълнен с 5% (тегло/тегло) SAS частици. Когато се коригира за действителния прием на храна, дневната доза SAS частици е между 1,8 и 2,0 g/kg телесно тегло през по-голямата част от периода на изследване

За да обобщим, критичен анализ на съществуващите проучвания с многократни перорални дози при гризачи разкрива пропуски в данните и несигурности, ограничаващи тяхната прогнозна стойност за оценката на риска от излагане на диета при хора. Някои проучвания се основават на зле охарактеризирани частици по отношение на състава, примесите или физико-химичните свойства и в повечето доклади липсва оценка на разпределението на размера на частиците.

Орална бионаличност и системно разпределение

300 mg/kg тъкан на физиологичен фон под границата на откриване) е открита в далака на животни, изложени на SAS. Досега не са открити частици на SAS в мезентериалните лимфни възли или друг орган след приемане през устата и следователно не е ясно дали наблюдаваните силициеви остатъци съществуват в частици или по-скоро в разтворено състояние, например като ортосилициева киселина.

Друг ключов въпрос, който все още не е проучен по отношение на бионаличността и системното разпределение, е ефектът на биомолекулите, свързани с наночастици, променящи техните повърхностни свойства [38]. По-специално, SAS наночастиците са известни с това, че са декорирани от протеини, например фибриноген или аполипопротеин А1, веднага щом влязат в контакт с биологични течности [39]. Терминът „протеинова корона“ е въведен, за да опише свързването на плазмените протеини с повърхността на наночастиците [40, 41]. Един от възможните ефекти на тази корона е, че тя медиира поглъщането на наночастици в клетките и органите, включително черния дроб, като по този начин влияе върху бионаличността и тъканното разпределение [42].

Излагане на хора

За да получат реалистични стойности на хранителната експозиция за европейско население, Dekkers и колеги [18] избраха хранителни продукти от местния супермаркет (готови за консумация ястия, супи, сосове, кафе-сметани, смеси за палачинки, подправки и добавки) въз основа на декларации присъствието на Е 551. След това общата концентрация на силициев диоксид в тези продукти се определя чрез индуктивно свързана плазмена атомно-емисионна спектрометрия (ICP-AES). След това оценките на хранителния прием на тези продукти за населението бяха изчислени с помощта на холандско проучване на консумацията на храна [43]. Въз основа на прогнозната консумация и нивата на силициев диоксид, полученият дневен хранителен прием е 9,4 mg SAS частици на kg телесно тегло. Това общо дневно количество включва всички SAS частици, независимо от степента им на агрегация или агломерация. Хидродинамичната хроматография с индуктивно свързана плазмена масова спектрометрия (HDC-ICPMS) показа, че до

40% от SAS частиците, открити в хранителните продукти, имат външен диаметър 2). По същия начин, по-ниските нива на включване от 1,25 и 2,5% съответстват на дневните орални дози от около 0,5 и 1 g/kg, съответно. За да обобщим, няколко пропуски както в дизайна на изследването, така и в интерпретацията на резултатите намаляват предсказуемостта на единствените налични дългосрочни биоанализи при гризачи, насочени към оралната безопасност на SAS частиците.

Потенциал за локални ефекти в стомашно-чревния тракт

В зависимост от естеството на идентифицираните опасности, които пораждат опасения, може да се наложи каноничната характеристика на риска да бъде допълнена с крайни точки, които не се оценяват рутинно при токсикологичната оценка на химикалите. Например, по-рано беше предложена хипотеза за нано-троянски кон с оглед на наблюдението, че в човешките белодробни епителни клетки, изложени на наночастици Co3O4 или Mn3O4, генерирането на реактивни кислородни видове (ROS) е по-високо, отколкото при контролите, изложени на еквивалентна концентрация на разтворени кобалтови или манганови соли [10]. Също така може да се мисли, че свързването на луминални антигени с SAS частици може да подпомогне тяхното доставяне до реактивни клетки на стомашно-чревния тракт. В това отношение отбелязваме по-специално, че нито едно от прегледаните по-горе проучвания не е изследвало локални ефекти върху лимфоидната тъкан на стомашно-чревната лигавица. Вместо да причиняват производството на ROS, SAS частиците са замесени в освобождаването на провъзпалителни цитокини (виж по-долу).

Въпреки че функцията на имунната система е да предпазва гостоприемника срещу инвазивни патогени, стационарният стомашно-чревен тракт е насочен към имунно заглушаване или толерантност, за да се избегнат безполезни реакции към безвредни хранителни антигени и полезни коменсални микроорганизми [48, 49]. При излагане през устата чужди частици срещат един слой лигавица, покриваща храносмилателния тракт. Тази голяма уязвима повърхност се защитава от свързаната с червата лимфоидна тъкан, която се състои от свободно организирани клъстери от лимфоидни клетки и по-организирани петна на Peyer. Известно е, че нано-частиците, включително тези от силициев диоксид, проникват през тази лимфоидна тъкан, лежаща в основата на епителната бариера [50–53], където могат да нарушат критичния баланс между толерантността към безвредните хранителни съставки и коменсалите, от една страна, и възпалителните реакции към патогените на от друга страна [54, 55]. Специфични анализи на пластирите на Peyer не са споменати в наличните проучвания за субхронична и хронична токсичност при гризачи и следователно не е възможно да се установи дали забавените локални ефекти върху свързаната с червата лимфоидна система са били адекватно изключени.

Показано е, че активираните от ендотоксин дендритни клетки освобождават мощния провъзпалителен цитокин интерлевкин-1β (IL-1β) при инкубация с SAS наночастици [68]. Механично този отговор е свързан с активиране на инфламазомния комплекс, който от своя страна разцепва предшественика протеин pro-IL-1β, за да освободи активен IL-1β. С оглед на това откритие ще бъде от ключово значение да се определи как реактивните дендритни клетки като тези, които се намират в нормалната невъзпалителна чревна лигавица, реагират на присъствието на хранителни SAS частици. IBD има многофакторен произход с генетична чувствителност, чревна микрофлора и дисфункция на имунната система на лигавицата като основни двигатели [60]. Освен това, различни диетични фактори са замесени в нарастващата честота на IBD и няколко автори изразиха опасението, че хранителните наночастици могат да допринесат за инициирането на това хронично възпалително заболяване [69–71]. Неволното стимулиране на имунната система от наночастици може да предизвика реакционна последователност, която отменя толерантността към хранителните съставки и коменсалните бактерии и по този начин благоприятства имуно-медиираните състояния с отличителните белези на IBD (прегледано от [72]).

Заключения

Принос на авторите

HCW, HN и MS са написали ръкописа. Всички автори прочетоха и одобриха окончателния ръкопис.

Благодарности

Изследванията в лабораторията на автора са подкрепени от Националната изследователска програма „Възможности и рискове от наноматериали“ Грант 406440-141619 и от грант FK-15-053 от „Forschungskredit“ на Университета в Цюрих.